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研究目的:通过观察GAD65、GAD67在青霉素诱导急性痫性大鼠海马各时程和各区域表达的变化特征,初步探讨痫性发作过程中的“抑制屏障突破机制”。材料与方法:将36只SD大鼠随机分为六组:正常组、生理盐水对照组、惊厥前期组、惊厥期2小时组、惊厥期6小时组及惊厥后期组。对各组大鼠痫性发作进行行为学Racine分级评估,同时记录每5分钟Racine 2级以上痫性发作次数,算出每分钟的发作次数即发作频率,进行统计学分析。用单导联记录方式跟踪记录各组大鼠的脑电图变化。在相应时间点将实验大鼠灌注处死,断头取脑,做连续冠状石蜡切片,用免疫组化检测各组大鼠海马各区域GAD的表达水平,所得相对灰度值进行完全随机设计资料的方差分析。结果:1.青霉素海马局部注射成功诱导了急性痫性发作模型,造模成功率87.5%。2.行为学变化正常组、生理盐水组无痫性发作。青霉素海马局部注射约24.88±19.28分钟后,出现2级及以上痫性发作。发作强度:在惊厥期0小时以Racine 2～3级为主;惊厥期1～2小时逐步增强到Racine 4～5级;惊厥期6小时又恢复到Racine 2～3级;在惊厥后期发作基本停止。发作频率:在惊厥期1～2小时,有一个痫性发作频率高峰(P＜0.01);在惊厥期6小时逐渐减慢(P＜0.01),在惊厥后期几乎无痫性发作。3.脑电图变化正常大鼠脑电波形频率以α、β波为主,散在可见θ波,波幅小于75uv。生理盐水组脑电图与正常组无明显差异。青霉素右侧海马局部注射约14.17±5.92分钟后脑电图上逐渐出现多种形式的痫性放电波,主要是散在的阵发性的尖波、棘波。在惊厥期2小时点,脑电图表现为中到高波幅的、持续性的尖波、棘波、尖慢波、棘慢波;在惊厥期6小时点,痫性放电波的频率和幅度逐渐减弱;在惊厥后期无行为学痫性发作,但脑电图上仍可见低波幅的痫性放电波。4.免疫组化结果4.1.正常大鼠各区GAD67的表达水平分别是:齿状回82.52±1.94,CA3区111.12±2.20,CA1区101.72±1.89,CA3＞CA1＞齿状回(P＜0.05)。注射生理盐水后,各区GAD67的表达无明显变化(P＞0.05)。右侧海马局部注射青霉素后CA3区、CA1区GAD67的表达:在惊厥前期明显增高,与正常对照组相比有显著差异(P＜0.01);在惊厥期2小时又明显下降(P＜0.01);在惊厥期6小时、惊厥后期又逐渐升高(P＜0.01)。齿状回GAD67的表达:在惊厥前期、惊厥期2小时、6小时与正常组比较,都无显著性改变(P＞0.05);在惊厥后期有显著性升高(P＜0.05)。4.2.正常大鼠各区GAD65的表达水平:齿状回81.07±1.03,CA3区98.64±0.72,CA1区96.44±0.52,CA3＞CA1＞齿状回(P＜0.05)。注射生理盐水后,各区GAD65的表达无明显变化(P＞0.05)。右侧海马局部注射青霉素后GAD65的表达:CA3区、CA1区、齿状回在惊厥前期、惊厥期2小时、惊厥期6小时与对照组比较都无明显变化(P＞0.05);在惊厥后期明显升高(P＜0.01)。结论:1.青霉素海马局部注射能成功诱导急性痫性发作模型。2.行为学及电生理学支持在青霉素诱导的急性痫性发作模型中存在抑制屏障突破机制。3.在青霉素诱导的急性痫性发作模型中,GAD67在惊厥前期表达增加,惊厥期表达减弱以及惊厥后期又逐渐恢复,其规律性表达提示痫性发作过程中存在“抑制屏障突破机制”。