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本论文就转Bt基因水稻花粉对家蚕的安全性作了系统评价，并就对家蚕安全的Bt新菌株的生物学作了初步研究。结果如下。 1 转Bt基因水稻花粉对家蚕的毒理学效应 采用ELISA法测定不同Bt水稻品系花粉中毒蛋白含量。籼稻品系TT9-3花粉中毒蛋白含量约占总可溶性蛋白的0.01％，显著低于粳稻KMD系列及以其为亲本的杂交后代籼稻纯合品系华池2000B系列。采用生物测定法就家蚕不同龄期幼虫对华池2000B1和TT9-3花粉以及Bt纯蛋白Cry1Ab的敏感性作了测定。家蚕1龄幼虫对华池2000B1花粉的敏感性相对较高，是其对TT9-3花粉的313.2倍。1龄幼虫对华池2000B1花粉比3龄幼虫更敏感3.83倍。与Cry1Ab蛋白相比，Bt水稻花粉对家蚕幼虫的毒性显著较低，差异达1000倍以上。 2 转Bt基因水稻花粉对家蚕的生物学效应 在室内条件下，选择相当于对家蚕1龄幼虫LC20和LC50剂量的华池2000B1花粉浓度DI（1311.4±161.8grains／cm2）和D4（24824.6±1895.1 grains／cm2），分别对1～3龄、3～5龄和1～5龄幼虫进行持续饲喂处理。Bt水稻花粉，特别在D4浓度下，可导致家蚕幼虫死亡率显著增高，发育历期显著延长，低龄幼虫体重、化蛹率和羽化率显著降低以及蚕茧质量下降等。Bt水稻花粉对低龄幼虫的影响较大，其效应可一直延续至成虫期。这表明华池2000B1水稻花粉对家蚕存活、生长发育和蚕茧性状等指标均有极为显著的负面影响。 3 转Bt基因水稻花粉对家蚕的行为学效应 采用叶碟法就家蚕幼虫对Bt水稻花粉的取食选择行为作了观测。当较高浓度的水稻花粉与无花粉对照同时存在时，家蚕幼虫极显著地选择无花粉对照；当较低浓度的水稻花粉与无花粉对照同时存在时，多选择低浓度的水稻花粉。不同龄期幼虫对较低浓度的不同水稻花粉的选择不尽相同。1龄幼虫多选择非Bt水稻花粉，后随虫龄增大，逐渐趋向选择Bt水稻花粉。就Bt水稻花粉而言，低龄幼虫显著偏向选择较低浓度花粉，而高龄幼虫有较多选择较高浓度花粉。 4 转Bt基因水稻花粉对家蚕的生理学效应 对家蚕1龄幼虫分别持续饲喂Bt水稻华池2000B1花粉和Cry1Ab蛋白直至化蛹，同时对经不同处理时间后的幼虫中肠消化酶系即淀粉酶、脂肪酶和蛋白酶（包括类胰蛋白酶、类胰凝乳蛋白酶、类弹性蛋白酶和氨肽酶）等的比活力进行了测定。Cry1Ab蛋白持续处理的家蚕幼虫在2龄末即全部死亡。Cry1Ab蛋白对低龄幼虫中肠消化酶系的活性存在明显影响，而且经c叮IAb处理的酶活随时间的变化趋势与对照的并不一致。Bt水稻花粉可不同程度地影响幼虫中肠消化酶活性，其中以对脂肪酶、类胰凝乳蛋白和类弹性蛋白酶活性的影响较为显著。这可能导致幼虫体内正常生理和代谢的动态平衡出现扰动，进而影响家蚕幼虫的生存和生长发育。5转Bt基因水稻花粉对家蚕的组织病理学效应 采用电镜技术就家蚕幼虫在持续饲喂Bt水稻花粉后，中肠细胞超微结构的病变过程作了连续观察。经Bt水稻花粉处理的24h内，家蚕幼虫中肠细胞内质网肿胀呈球形，并伴有少量空泡产生。此后中肠细胞不断空泡化，微绒毛逐渐与细胞断裂，并出现连片脱落;最终中肠细胞破裂，大量胞质外流至肠腔内。Bt水稻花粉对家蚕幼虫中肠细胞的病理学效应与Cryl Ab蛋白处理的相似。6日照对转Bt基因抗虫水稻花粉毒蛋白的影响 不同自然日照时间处理的Bt水稻花粉中毒蛋白的含量存在一定变化。Bt水稻花粉中毒蛋白的相对含量起初先明显下降，后随着时间延长，呈现上升趋势。日照处理对花粉中可溶性蛋白含量无显著影响。就不同日照时间处理的Bt花粉对家蚕蚁蚕的毒力测定结果表明，随处理时间延长，LC:。值虽有增高趋势，但变化不明显。这表明日照对Bt水稻花粉中的毒蛋白含量及活性均无明显影响。7转Bt基因抗虫水稻花粉的田间飘移分布 通过2年的田间调查，发现飘落在桑叶上的Bt水稻花粉数量随飘移距离增加而呈指数降低。2002年花粉平均累积飘落密度从稻田内的最高密度255.0粒/c mZ降低至离田埂gm处的34.6粒/cm，。相似地，2003年的水稻花粉平均飘落密度从稻田内的190.8粒/c mZ锐降至离田埂gm处的6.。粒/c mZ。Bt水稻花粉飘落密度随桑树植株高度增加而明显下降。与生长期较长的桑叶相比，水稻花粉在嫩叶上的飘落密度显著较低。降雨可极显著减少Bt水稻花粉在桑计}一上的飘落密度。采用双面胶和涂有凡士林的载玻片监测水稻花粉飘落密度的结果与桑叶上测得的基本一致。8自然飘落的转Bt基因抗虫水稻花粉对家蚕生物学特性的影响 2002年和2003年分别采集田间不同距离自然飘落有Bt水稻华池Z000BI花粉的桑仆卜，在室内对家蚕初孵幼虫进行连续饲喂。田间不同距离自然飘落的Bt水稻花粉，对家蚕生存、生长发育、繁殖以及蚕茧质量等均无显著影响。2年试验结果均表明，在Bt水稻平均种植面积为3巧.85m2的条件下，自然飘落的Bt水稻花粉对家蚕应无显著的负面影响。9苏云金杆菌Y玉2000菌株的杀虫活性评价 应用时间一剂量一死亡率模型就Bt菌株YJ一2000对6种鳞翅目昆虫的杀虫活性作了初步评价。该菌株对家蚕基本无毒性，而对蔬菜害虫如