【摘 要】
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目的:目前,国内应用的huGM-CSF产品也多为原核表达产物,而且多为进口制剂,他们应用于国人是否合理,至今尚不清楚,国内huGM-CSF克隆和测序的报道也相对较少.所以,目前有必要深
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目的:目前,国内应用的huGM-CSF产品也多为原核表达产物,而且多为进口制剂,他们应用于国人是否合理,至今尚不清楚,国内huGM-CSF克隆和测序的报道也相对较少.所以,目前有必要深入研究国人GM-CSF基因序列及GM-CSF的特点.本研究目的就是在国内克隆GM-CSF基因cDNA并进行测序,为进一步研究国人GM-CSF基因提供数据,并为GM-CSF在我国临床上的合理应用提供一定的实验依据.方法:取健康人新鲜肝素抗凝的外周静脉血,以等量PBS稀释后,用淋巴细胞分离液进行密度梯度离心,收集单个核细胞.将收集的单个核细胞,用含小牛血清、青霉素和链霉素的DMEM重悬,取一滴重悬液涂片Giemsa-Wright染色,高倍镜下观察单个核细胞.另取一滴重悬液,与台酚兰染液混合,于血球计数板上计数.然后,用含小牛血清、植物血凝素、佛波酯、青霉素和链霉素的DMEM培养液分三组分别培养所收集的单个核细胞,培养时间依组为2小时、4小时、6小时,然后收集各组培养细胞,并再次Giemsa-Wright染色观察单个核细胞和台酚兰染液染色计数单个核细胞.结论:GM-CSF基因cDNA克隆成功,为对其进一步研究奠定了基础;成功构建了融合质粒pcDNA3.1-huGM-CSF,为huGM-CSF的真核表达提供了条件;测定了GM-CSFcDNA序列,发现了一个基因与文献报道的不同,为GM-CSF在我国临床上的合理应用提供了一定的实验依据.
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