与猪链球菌2型SntA蛋白互作的猪脑组织蛋白质的鉴定

• 作 者: 万云
• 机 构: 华中农业大学
• 出 处: 华中农业大学
• 发表日期: 2009年期
• 关键词: 猪链球菌2型 外膜蛋白SntA 猪脑组织 酵母双杂交 Pull-down 蛋白质相互作用

猪链球菌(Streptocuccus suis)是当前严重危害养猪业的一种重要病原菌。根据荚膜多糖抗原成分的不同,将猪链球菌分为33个血清型,其中猪链球菌2型(S.suisserotype 2,SS2)是最常见和毒力最强的血清型之一,是一种重要的人兽共患病原菌,导致猪和人的脑膜炎、关节炎、肺炎、心内膜炎等病理变化,引起人的败血性休克。SS2进入宿主后,由定植部位进入血液循环,再突破血脑屏障进入中枢神经系统,引起脑膜炎。在这些感染过程中,细菌必然与宿主的多种细胞相互作用,发生损伤与抗损伤反应。SS2如何与宿主脑组织相互作用,是我们深入理解其突破血脑屏障并引起脑膜炎的分子机制中的一个重要方面。同样,研究SS2蛋白质与宿主肺组织的相互作用是解析肺炎发生机制的重要途径。SntA是SS2的一种外膜蛋白,含有明显的LPXTG膜锚定序列和RGD基序,推断为宿主整联蛋白的直接结合位点,可能在病原菌与宿主相互作用中起到重要作用。此外,SntA蛋白可能通过结合宿主体内血红素来获取螯合铁或者其他形式的铁,因此推断SntA可能是猪链球菌的一种毒力相关因子。本研究首先分别构建了猪脑组织和肺组织的酵母双杂交cDNA文库,然后运用酵母双杂交技术从猪脑组织cDNA文库中筛选到多个与SntA蛋白质相互作用的蛋白质,并进行了验证,主要研究成果如下:1.成功的分离、纯化了猪脑组织及肺组织的双链cDNA,构建了猪脑酵母双杂交cDNA文库及猪肺酵母双杂交cDNA文库,用于后续研究;2.运用酵母双杂交技术从猪脑组织cDNA文库中筛选到33个分别与SntA相互作用的阳性克隆。经PCR筛选、测序和结果分析,获得4个感兴趣的蛋白,分别为过氧化物酶(AOP2)、补体1q的A亚单位(C1qA)、泛素连接酶(Ubiquitin-conjugationenzyme)以及G蛋白(G protein);3.为了降低假阳性发生率,经筛选后进行了回转实验验证,并选取AOP2和C1qA分别与SntA蛋白进行体外Pull-down验证,证明SntA分别与AOP2和C1qA相互作用。运用生物信息学,通过分析与预测,初步推断了SntA-AOP2和SntA-C1qA互作的原理及在SS2对宿主致病中所起到的作用。该结果为猪链球菌致病分子机制的研究奠定了基础。