论文部分内容阅读
巴楚蘑菇属于子囊菌纲Ascomycetes,马鞍菌科Helvella,其学名为裂盖马鞍菌(Helvella leucopus),是新疆一种珍贵的野生菌品种。目前对其的研究还停留在营养成分的分析和粗提取物的活性研究等方面,鲜有对其某种的单一活性成分进行深入研究的报道。本文以巴楚蘑菇为原料,从巴楚蘑菇多糖入手,对巴楚蘑菇多糖进行提取、分离纯化、成分结构、抗氧化活性以及抗肿瘤活性进行了相对系统的研究,结果表明:以多糖得率为指标,采用响应面法对巴楚蘑菇多糖热水浸提的工艺进行了优化,得到了巴楚蘑菇多糖的最佳提取工艺为提取温度84.9℃,提取时间94min,提取pH7.1,提取料液比1:42(g/mL),此条件下多糖的得率为6.52%(w/w)。方差分析表明,各因素对多糖得率的影响作用的顺序为:提取pH>料液比>提取时间>提取温度。多糖脱蛋白实验表明,蛋白酶-Sevage试剂联用法为最佳的脱蛋白方法。粗多糖经脱蛋白后,经过DEAE-52纤维素柱层析和Sephadex G-150葡聚糖凝胶柱层析纯化,最后得到了两种多糖组分HLP1-1和HLP2-1。HLP1-1为白色絮状物,HLP2-1为淡黄色粉末。两种多糖均有良好的水溶性,均为非淀粉型多糖,不含有蛋白质、多酚和还原糖。HLP1-1和HLP2-1的刚果红实验结果显示,HLP2-1可能存在三螺旋结构,而HLP1-1中不存在三螺旋结构。紫外光谱扫描的结果可以看出两种多糖均不含蛋白和核酸。HLP1-1和HLP2-1的红外图谱结果相似,且均符合典型的多糖的红外光谱特征。通过离子色谱和PMP衍生化对两种多糖的单糖组成进行了分析,HLP1-1中鼠李糖:氨基葡萄糖:甘露糖的摩尔比为11.80:1:78.60,HLP2-1中鼠李糖:氨基葡萄糖:葡萄糖:甘露糖的比例为4.22:1.00:18.12:27.33。HLP2-1与HLP1-1的1HNMR结果类似,两种多糖1HNMR图谱中都存在鼠李糖中的甲基氢信号和氨基糖中的N-乙酰基中的甲基氢信号。同时,两种多糖既含有α吡喃糖残基,也有β吡喃糖残基,都不含有呋喃糖残基。通过GPC对多糖的分子量进行测定,两种多糖的分子量接近,HLP1-1的分子量为21,382Da,HLP2-1的分子量为23,038Da。采用三种方法(ABTS法、FRAP法、微量邻苯三酚自氧化法)对多糖HLP1-1和HLP2-1的抗氧化活性进行了测定,两种多糖HLP1-1和HLP2-1的三种抗氧化能力都随浓度的增加而增加,HLP1-1的三种抗氧化活性均弱于HLP2-1。采用MTT法测定了两种多糖对人体肝癌细胞HepG-2的抑制作用,两种多糖HLP1-1和HLP2-1对人体肝癌细胞HepG-2的增殖具有抑制作用。HLP2-1对肿瘤细胞增殖的抑制作用要强于HLP1-1。