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牛乳及其乳制品中含有丰富的蛋白质,深受人们的青睐,尤其对婴幼儿和老年人来说,是日常生活中主要的营养物质来源,同时,牛乳又是主要的过敏食物之一。调查表明,牛乳过敏在人群中的发病率为0.3-7.5%,其中一岁以下婴幼儿中的发病率达到2-3%。牛乳中α-乳白蛋白属于溶菌酶家族,是导致牛乳过敏的主要过敏原蛋白之一,据不完全统计,超过51%的牛乳过敏是由α-乳白蛋白引起的。牛乳中α-乳白蛋白与人乳中α-乳白蛋白的同源性约为74%,另有6%的氨基酸残基化学性质相似,营养价值高、但致敏性强,而牛乳常作为原料用于各种食品,所以开展针对食品中α-乳白蛋白的检测具有重要的理论和现实意义。本研究主要包括牛乳α-乳白蛋白的分离纯化、抗牛乳α-乳白蛋白单克隆抗体的制备及纯化、量子点偶联标记单克隆抗体以及食品中过敏原α-乳白蛋白检测方法的建立。主要研究内容如下：(1)采用DEAE-Sepharose Fast Flow弱碱性阴离子交换树脂结合SephadexG-75凝胶过滤层析法分离纯化牛乳中α-乳白蛋白,利用SDS-PAGE电泳和灰度扫描表征所得蛋白的纯度,并采用lowry法测定蛋白浓度,结果表明：得到的α-乳白蛋白纯度大于95%,得率约为20.5%。(2)以纯化的α-乳白蛋白为抗原免疫Balb/c小鼠,利用间接ELISA法监测免疫小鼠血清效价,当血清效价达到1：10.0000时,宰杀小鼠并取其脾脏细胞。小鼠脾细胞与杂交瘤细胞融合后经显微镜观察,细胞融合率>70%,筛选融合细胞孔,结果显示阳性孔约3%,得到的单克隆抗体腹水效价约3×105。采用辛酸-硫酸铵联合沉淀法纯化腹水中单抗,SDS-PAGE电泳表征单抗纯度,同时采用间接竞争ELISA、免疫印迹检测单抗活性及特异性,结果显示所得腹水经纯化后保证了单克隆抗体的活性且特异性好,与牛乳中其它主要过敏原无交叉反应。(3)以纯化的单克隆抗体与荧光量子点进行偶联,通过反应物配比的优化,确定量子点、EDC、NHS、单克隆抗体摩尔比为1：10：6：4时有较好的偶联效果。采用Sephadex-G200凝胶层析柱纯化偶联产物,再借助荧光分光光度计分析纯化产物,发现偶联后量子点最大发射峰蓝移3nm,证实偶联过程的可行性。同时,利用斑点印迹显示已偶联量子点的抗体可与α-乳白蛋白结合,并在紫外成像系统下产生荧光,说明单抗偶联量子点后仍保留较强的免疫活性。(4)建立了检测α-乳白蛋白的间接竞争FLISA方法,同时确定的工作条件如下：包被抗原浓度为1μg/mL,抗体稀释倍数为1：3200倍,竞争反应抗原及抗体配比为1：1。结果表明：检测浓度在0.1～100ng/mL范围内有较好的线性关系,半抑制量浓度为0.03μg/mL,最低检出限为0.1ng/mL,并用建立的方法对市场销售乳制品中α-乳白蛋白进行了检测,与常规ELISA法相比,本论文建立的方法检测灵敏度更高。