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目的:缺血性脑损伤通过caspase-9介导内源性信号通路导致细胞凋亡，procaspase-9去亚硝基化促进其水解活化。同时，X连锁凋亡抑制蛋白(X-linkedinhibitor of apoptosis protein，XIAP)通过抑制含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(cysteinyl aspartate specific proteinase，Caspase)发挥抗凋亡活性，XIAP亚硝基化之后其抗凋亡活性受到抑制。硫氧还蛋白(Trx)系统是一种介导蛋白去亚硝基化和转亚硝基化的重要的氧化还原酶系统。本实验的目的是证明在缺血再灌注模型中，procaspase-9与XIAP是否发生了转亚硝基化及这种转亚硝基化是否影响了caspase-9介导的凋亡信号通路，Trx系统是否参与了二者的转亚硝基化，抑制二者的转亚硝基化能否减轻脑缺血所致的神经元损伤。 方法:培养HEK293T细胞，利用PEI转染法转染野生型procaspase-9及其半胱氨酸突变体并给予外源性一氧化氮供体(GSNO)孵育，生物素转化法检测鉴定procaspase-9的亚硝基化位点。脂质体转染法共转染procapase-9与XIAP入SH-SY5Y细胞，给予缺糖缺氧/复氧(OGD/reoxygenation)处理，免疫印迹法检测procaspase-9的水解活化情况。采用SD大鼠四动脉结扎全脑缺血模型，生物素转化法检测procaspase-9与XIAP的亚硝基化在脑缺血再灌注中的变化时程并观察TrxR的拮抗剂DNCB、TrxR的反义寡核苷酸AS-ODN、抑制procaspase-9与XIAP结合的干扰肽TAT-AVPY对它们亚硝基化的影响，与此同时，免疫印迹法检测procaspase-9的水解活化情况。免疫沉淀检测在脑缺血再灌注中procaspase-9与XIAP的结合情况。焦油紫染色检测DNCB、TrxR AS-ODN、TAT-AVPY对缺血再灌注所致的神经元损伤的影响。 结果:鉴定出Cys325是procaspase-9的主要亚硝基化位点。在脑缺血再灌注中，procaspase-9发生了去亚硝基化并活化，XIAP发生了亚硝基化，二者的亚硝基化变化趋势呈负相关。在脑缺血再灌注中procaspase-9与XIAP结合增加且与procaspase-9、XIAP的亚硝基化变化趋势一致。抑制TrxR活性或表达、抑制procaspase-9与XIAP结合均抑制了procaspase-9的去亚硝基化及活化和XIAP的亚硝基化。形态学结果发现DNCB、TrxR AS-ODN、TAT-AVPY减轻了缺血再灌注所致的神经元损伤。阻止procaspase-9与XIAP的转亚硝基化能够减轻OGD所致的procaspase-9的水解活化。 结论:脑缺血再灌注中procaspase-9与XIAP结合增加并发生了转亚硝基化，Trx系统介导了二者的转亚硝基化，XIAP因发生亚硝基化而失去对caspases的抑制，procaspase-9因去亚硝基化而水解活化进而促进神经元凋亡。抑制procaspase-9与XIAP转亚硝基化能够减轻脑缺血再灌注所致的神经元损伤和OGD/reoxygenation导致的procaspase-9水解。