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目的:研究沼生忍冬的化学成分并建立其标识性成分HPLC含量测定的方法,探讨沼生忍冬提取物的肝保护活性。方法:1)采用硅胶、反相硅胶、大孔树脂和Sephadex LH-20等多种色谱技术从沼生忍冬中分离纯化有效部位有效成分,并通过理化性质及波谱数据鉴定有效成分的化学结构。2)采用HPLC-UV法测定3种咖啡酰奎宁酸类成分的含量,色谱条件为:PhenomenexC18(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈(A)-0.2%磷酸水溶液(B)(梯度洗脱:0-13min,12%A;13-25min,12-22%A;25-45 min,22%A),检测波长327 nm;采用HPLC-UV法测定马钱苷的含量,色谱条件为CosmosilPh-AR(250 mm×4.6mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈(A)-0.2%磷酸水溶液(B),梯度洗脱(0-30min,8%A～9%A),检测波长236nm,流速均为1.0mL·min-1,柱温均为30℃,进样量均为10μL。3)利用DPPH清除试验来考察沼生忍冬叶和藤70%乙醇提取物以及叶的大孔树脂纯化物的体外抗氧化活性。采用体外抗氧化活性最强的提取物进行体内抗肝损伤活性试验。取昆明种小鼠,随机分为空白组、模型组、联苯双酯组(150mg/kg),沼生忍冬叶30%乙醇洗脱部位高、中、低(500、250、125mg/kg)组,每组10只。除空白组、模型组外,其余各组每天灌胃给药,连续7天,末次灌胃给药2h后,除空白组外,其余各组腹腔注射0.12%四氯化碳橄榄油溶液。12h后断颈取血,测定血清中ALT、AST的活性。取肝脏、脾脏称重,计算脏器系数,制备肝匀浆,测定肝匀浆中MDA、SOD、GSH的水平,并进行病理组织学观察。结果:1)从沼生忍冬藤中分离得到10个化合物,分别鉴定为:3,7-二甲基槲皮素(1)、3.3’-二甲基槲皮素(2)、槲皮素(3)、乌苏酸(4)、马钱子苷(5)、绿原酸(6)、槲皮素5-0-β-D-葡萄糖苷(7)、3,4-二咖啡酰奎宁酸(8)、3,5-二咖啡酰奎宁酸(9)和4,5-二咖啡酰奎宁酸(10)。2)样品中3种咖啡酰奎宁酸类成分(化合物6,9,10)均能达到基线分离,且线性关系良好,平均加样回收率分别为100.15%、99.69%和99.51%。沼生忍冬中3种成分的含量为花最高(3.99%、1.77%、2.33%)、叶次之(2.62%、1.73%、0.90%)、藤最低(0.74%、0.25%、0.15%)。马钱苷能达到基线分离,且线性关系良好,平均加样回收率为99.23%。藤中0.15%,叶中0.17%,花中未检测到。3)沼生忍冬叶30%乙醇洗脱部位具有较强的DPPH清除能力,IC50为51.50μg·mL-1。对沼生忍冬叶30%乙醇洗脱部位体内肝保护作用进行初步研究。沼生忍冬叶30%乙醇洗脱部位能显著降低CC14致小鼠血清中ALT和AST的活性的升高,并能显著升高小鼠肝匀浆中SOD、GSH的活性,降低MDA的含量,且能明显改善肝组织的病理损伤。结论:1)化合物1、2和7为首次从忍冬属植物中分离得到,其余化合物均为首次从该植物中分离得到。2)HPLC含量测定方法准确,简便,分离效果好,可用于沼生忍冬中绿原酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸和马钱苷的含量测定。3)沼生忍冬叶提取物具有较好的肝保护作用,作用机制可能与其抗氧化活性相关。