【摘 要】
：
目的：构建细胞穿膜肽(CPPs)PEP-1和细胞周期抑制蛋白P27mt融合蛋白的原核载体，并在大肠杆菌中表达。 方法：用PCR法扩增pORF9-hp27mt中含有目的片段的DNA区域，低熔点琼脂糖
论文部分内容阅读
目的：构建细胞穿膜肽(CPPs)PEP-1和细胞周期抑制蛋白P27mt融合蛋白的原核载体，并在大肠杆菌中表达。
方法：用PCR法扩增pORF9-hp27mt中含有目的片段的DNA区域，低熔点琼脂糖电泳回收607bp的目的基因片段，回收片段于PCR仪上进行3末端加A，3末端加A产物再与5末端带有T的pGEM-TEasy连接，构建中间载体pGEM-TEasy-p27mt。人工合成编码PEP-1(KETWWETWWTEWSQPKKKRKV)21个氨基酸的两条寡核苷酸片段，退火后形成一条寡聚核苷酸双链，双链两端分别是限制性内切酶XhoⅠ和NdeⅠ的酶切位点，pET15b用XhoⅠ和NdeⅠ双酶切，低熔点琼脂糖回收5701bp的pET15bDNA片段，两条DNA片段由T4DNA连接酶定向插入连接形成pET15b-pep-1。重组质粒pET15b-pep-1与pGEM-TEasy-p27mt用BamHⅠ和XhoⅠ双酶切，低熔点琼脂糖回收607bp的p27mt片段和5769bp的pET15b-pep-1片段，由T4DNA连接酶定向插入连接形成pET15b-pep-1-p27mt重组质粒，转化DH5α感受态细胞。大量提取该质粒转化E.coliBL21(DE3)LysS，经IPTG诱导表达后，表达产物用SDS-PAGE及Westernblot分析鉴定。
结论：PEP-1-P27mt的正确表达，为体内应用细胞周期抑制蛋白诱导肿瘤细胞调亡提供了理论基础。pGEM-TEasy载体使目的基因的克隆过程更加简便容易，构建更加准确无误。
其他文献
在我国6~66KV中低压配电网中性点接地方式主要以小电流接地为主。基于这种接地方式的特点,如故障电流小等,系统可带故障继续运行一段时间。但正是由于故障电流不明显、电弧不
两个IKK激酶家族成员IKKε和TBKl在细胞抗病毒感染，和Toll样受体介导的I类干扰素分泌过程中起重要作用。IKKε在TBKl能磷酸化转录因子IRF3，使其二聚化激活，并转入核内去启动干扰
在当今的工业生产中,金属构件在各类生产设备中被广泛地使用。而伴随着金属构件的制造、加工以及使用,会不可避免地在其表面或者内部形成微裂纹。同时,在长期载荷、温度变化
近年来，北京市大兴地区的经济和建设快速发展，伴随而来的是电网的规模日益扩大和结构愈趋复杂，现已提出的电网电压的控制方法面临一些新的问题，其难以满足地区电网运行对于安全、
重庆市提出加快老龄事业和产业发展,进一步提升全市老年人的获得感、幸福感和安全感.而高龄失能老人的赡养工作仍是个困扰社会和很多家庭的难题.基于此现象,通过走访调查重庆
风力发电是目前利用新能源发电的重要部分之一,其中以基于双馈感应电机(Doubly-Fed Induction Generator,DFIG)的风力发电系统为主。本文的主要研究内容是双馈风力发电系统在非理想电网条件下的控制策略研究,其中非理想电网条件包括电网电压骤降,谐波电压以及不平衡电压,主要研究内容和结论如下:(1)分别建立三相静止坐标系和两相同步旋转坐标系下单质量体风力机,双馈电机和背靠背PW
辽宁翻译史是中国翻译史的组成部分,对其翻译文学史的研究,是让世界人民了解辽宁地域文化的重要窗口,是更好地弘扬和宣传辽宁文化的重要举措.通过对辽宁地区的翻译史研究,探
指称问题是语言哲学和语义学的基本问题,上世纪的经典研究主要是运用逻辑推理和演算探讨词语与事物的抽象联系.进入21世纪后,随着语言学研究向语言哲学方向的发展,指称研究越
经济全球化和全球一体化快速发展的大背景下,通过有说服力的资料信息和生动具体的实例比较和分析践行“一带一路”倡议的葡萄牙语译员面临的机遇和挑战,以此来阐释葡萄牙语译