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本研究通过原核系统表达了固始鸡重组IL-2蛋白,经过镍亲和层析柱纯化后,分别与鸡新城疫灭活苗和鸡痢疾志贺氏菌灭活苗同时免疫鸡群,以检测其对疫苗的免疫增强效果。共分三个试验。 试验一 将低温保存的基因工程表达菌pET28a-GSIL-2/BL21(DE3)复苏后,经过IPTG诱导,表达了固始鸡重组IL-2蛋白。SDS-PAGE电泳结果显示:目的蛋白分子量为18kD左右,薄层扫描分析表明表达量占菌体总蛋白的18%;经超声波裂解菌体,离心初步分离,目的蛋白主要以包涵体形式存在,但在细胞裂解上清中也有一定含量。将包涵体经过初步分离、变性、镍亲和层析柱纯化、复性,并对纯化的目的蛋白进行生物学活性检测。MTT试验结果表明:重组IL-2对经ConA活化的鸡脾淋巴细胞具有明显的体外增殖作用,这表明重组IL-2具有一定免疫增强作用。 试验二 固始鸡重组IL-2作为免疫增强剂对鸡新城疫灭活苗免疫效果的影响。5日龄200只鸡随机分为5组,每组40只鸡(公母各半),即空白对照组,新城疫疫苗组,新城疫疫苗+IL-2(10ug)组,新城疫疫苗+IL-2(50ug)组,新城疫疫苗+IL-2(250ug)组。所有免疫组均于8日龄分别免疫接种相应疫苗,18天后各组均取10只鸡用于动物攻毒保护试验,并进行免疫器官指数、血清抗体效价和外周血T淋巴细胞亚群的测定,试验结果表明:重组IL-2蛋白增强了新城疫疫苗的免疫效果,提高了血清中抗体水平、T淋巴细胞CD3+、CD4+、CD8+亚群水平、CD4+/CD8+的比值和各免疫器官指数,且部分指标差异达到显著水平(P<0.05),促进鸡免疫器官的生长发育,增强鸡的免疫功能。 试验三 固始鸡重组IL-2作为免疫增强剂对鸡志贺氏菌灭活苗免疫效果的影响。5日龄200只鸡随机分为5组,每组40只鸡(公母各半),即空白对照组,鸡志贺氏菌苗组,鸡志贺氏菌苗+IL-2(10ug)组,鸡志贺氏菌苗+IL-2(50ug)组,鸡志贺氏菌苗+IL-2(250ug)组。所有免疫组于21日龄分别免疫接种相应疫苗,20天后各组均取10只鸡用于动物攻毒保护试验,并进行免疫器官指数、血清抗体效价和外周血T淋巴细胞亚群的测定,试验结果表明:重组IL-2蛋白增强了鸡志贺氏菌苗的免疫效果,提高了血清中抗体水平、T淋巴细胞CD3+、CD4+、CD8+亚群水平、CD4+/CD8+的比值和各免疫器官指数,且部分指标差异达到显著水平(P<0.05),促进鸡免疫器官的生长发育,增强鸡的免疫功能。 本研究结果表明,固始鸡重组IL-2蛋白可作为免疫增强剂代替其他佐剂来使用,且很少量的IL-2蛋白就能发挥增强免疫效果的作用,为开发生产天然的免疫增强剂提供了新的途径。