【摘 要】
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胶原蛋白是人体内最重要的结构蛋白之一。它具有特征性的(Gly-X-Y)n重复序列,且其中X和Y位置的氨基酸通常是脯氨酸和羟脯氨酸。与从动物中提取的胶原蛋白相比,非动物来源的重
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胶原蛋白是人体内最重要的结构蛋白之一。它具有特征性的(Gly-X-Y)n重复序列,且其中X和Y位置的氨基酸通常是脯氨酸和羟脯氨酸。与从动物中提取的胶原蛋白相比,非动物来源的重组胶原蛋白具有低免疫原性等优点,因此是生物医学的理想材料之一。本文围绕重组胶原蛋白的制备和区域稳定性开展了三个方面的工作:(1)发酵过程中的条件优化。优化发酵条件包括:培养基的选择、培养环境的pH以及诱导温度,从而实现V-CL的产率高达14.3g/L。(2)重组胶原蛋白的高效纯化。使用酸沉降的方法实现一步纯化胶原蛋白V-CL。与传统的小型层析法相比,酸沉降的方法更加简单、高效,并且无重金属离子的引入,更加环保。(3)胶原蛋白酶切位点的稳定性。研究V-CL蛋白酶切位点的先后顺序,并与预测的稳定性特征进行比较。实验确定的蛋白酶切先后顺序符合预测的稳定性特征,说明了蛋白的酶切是遵循特定顺序进行的。由于胶原蛋白的酶切通常与消化疾病相关,本研究揭示了胶原蛋白和相关疾病模型的生物降解途径。
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