马铃薯高效离体再生体系构建及试管薯遗传转化的优化

来源 :山西农业大学 | 被引量 : 4次 | 上传用户:XUE19880204
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马铃薯(Solanum tuberosum L.)为粮菜兼用型植物,市场需求量大。然而,马铃薯市场仍面临着育种水平较低、优质种薯供应不足、产业化生产水平仍需提高等问题。为此,本研究开展了马铃薯的离体再生与遗传转化研究,以期为其新品种培育及规模化生产等难题的解决奠定基础。本研究以马铃薯品种“大西洋”、“克新23”、“尤金”为材料,建立并优化了茎段、叶片、试管薯、大田薯薯芽及薯块离体再生体系,并以马铃薯品种“大西洋”的试管薯切片为受体材料,对其进行了遗传转化研究。在离体再生体系构建过程中,研究了不同植物激素浓度及其配比、不同消毒方法对不同起始试材离体再生过程的影响。研究发现:1、不同外植体的最佳不定芽诱导培养基分别为MS+3 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA+1.5 mg/L ZT(茎段直接诱导)、MS+2mg/L 6-BA+0.6 mg/L NAA+2 mg/L ZT(茎段间接诱导)、MS+3 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA+2 mg/L GA3(叶片直接诱导)、MS+2 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+3 mg/L GA3(叶片间接诱导)、MS+2 mg/L ZT+1.5 mg/L IAA+1 mg/L 6-BA(试管薯)、MS+2mg/L 6-BA+0.8 mg/L NAA(大田薯薯芽)、MS+3 mg/L 6-BA+2.5 mg/L NAA(大田薯薯块);2、最佳的不定芽伸长培养基为MS+1.5 mg/L GA3+1.5 mg/L ZT+0.5 mg/L NAA,其伸长率可达93.47%,不定芽的均伸长长度可达2.46 cm;3、不定根诱导的最佳方法为MS+0.01 mg/L EBR+0.1 mg/L NAA,其生根频率约100%;4、大田薯薯芽先用0.1%升汞浸泡8 min,再用10%次氯酸钠溶液浸泡3 min,消毒效果最好,无菌率为95.27%;大田薯薯块只用0.1%升汞浸泡13 min,无菌率可达75.98%。以“大西洋”试管薯切片为受体材料,研究了影响农杆菌介导的部分基本参数对马铃薯遗传转化的影响,建立了试管薯切片的遗传转化体系。研究发现:适宜的乙酰丁香酮(AS)浓度(50μmol/L)、菌液浓度(OD600为0.5)、侵染时间(5 min)、共培养时间(3 d)均能有效提高试管薯切片的转化频率。应用该转化体系成功获得了马铃薯的转基因抗性苗,抗性芽获得率约为43.33%,转化效率约为32.67%。
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