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目的:研究环氧化酶2(COX-2)和基质金属蛋白酶(MMP)在莱菔硫烷(SFN)抑制膀胱癌细胞转移中的作用。
方法:以人膀胱癌细胞系T24为离体研究模型,用5、10、20μmol/L的莱菔硫烷对其进行处理。采用蛋白印迹(western blot)法检测莱菔硫烷对人膀胱癌细胞环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)、基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinase,MMP)MMP-2和MMP-9、基质金属蛋白酶抑制剂(tissueinhibitor of matrix metalloproteinase,TIMP)TIMP-1和TIMP-2蛋白表达的影响。明胶酶谱法检测基质金属蛋白酶-2/-9的活性。采用小分子干扰RNA(smallinterfering RNA,siRNA)和过表达质粒(pcDNA3.1-COX-2/MMP-2/MMP-9)研究莱菔硫烷抗肿瘤转移过程中COX-2及MMP-2/-9的相互关系,运用反转录聚合酶链式反应(reverse transcription PCR,RT-PCR)技术检测细胞沉默和过表达的效果;采用侵袭实验(Transwell)研究莱菔硫烷对肿瘤转移的影响及COX-2及MMP-2/-9基因在肿瘤转移中的作用。
结果:莱菔硫烷能以剂量依赖和时间依赖方式抑制T24细胞MMP-2、MMP-9的蛋白表达;莱菔硫烷可明显抑制MMP-2、MMP-9的酶活性并呈剂量依赖关系,且莱菔硫烷对MMP-9的作用更为敏感;莱菔硫烷可明显促进TIMP-1、TIMP-2蛋白表达,其中20μmol/L莱菔硫烷作用24h后效果最显著;COX-2 siRNA可抑制MMP-2、MMP-9 mRNA的表达,抑制率达到70%以上;而MMP-2/-9 siRNA对COX-2 mRNA的表达没有明显作用;侵袭实验结果表明,20μmol/L莱菔硫烷可明显降低T24细胞穿透基底膜的能力,COX-2和MMP-2/-9siRNA转染后细胞侵袭能力明显受到抑制,COX-2和MMP-2/-9过表达质粒转染后T24细胞侵袭能力增强。
结论:莱菔硫烷通过抑制COX-2及其下游MMP-2/-9抑制肿瘤细胞转移。