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目的:本研究通过配制以龟板有效成分甾酮((+)-Cholesten-3-one,简称S9)为主要成分的龟板酊,作用于雄激素性脱发模型小鼠,观察龟板酊对雄激素性脱发模型小鼠毛发生长的疗效,并从Wnt/β-catenin信号通路和毛囊干细胞角度探讨其作用机制,为治疗雄激素脱发的新药研究提供思路。方法:1.使用二氢睾酮(Dihydrotestosterone,DHT)5mg/kg/d背部皮下注射的方法制作雄激素性脱发模型小鼠,将小鼠分为五个组:空白组(简称B)、模型组(简称M)、基质组(简称MA)、阳性对照组(简称PC)、实验组(简称E)。干预措施:五组均脱毛。空白组不干预;模型组每天注射DHT;基质组每天注射DHT+每天两次外用基质液;阳性对照组每天注射DHT+每天一次外用5%米诺地尔溶液;实验组每天注射DHT+每天两次外用龟板酊。观察小鼠毛发生长情况,包括脱毛区皮肤开始变黑的时间和毛发长出皮表的时间对比。2.实验第21d,取各组小鼠脱毛区皮肤组织进行苏木精-伊红染色(Hematoxylin-Eosin,HE),观察药物对毛囊的影响,包括毛囊数量和终毛/毳毛比值的比较。3.实验第21d,取各组小鼠脱毛区皮肤组织进行免疫印迹(Western blot,WB)和免疫荧光(Immunofluorescence,IF)检测,检测 Wnt1Ob、GSK-3 β、DKK1、CD34、Integrin β1蛋白的定量表达和 Wnt10b、β-catenin、LEF1、c-Myc、CK15、Integrinβ 1蛋白的定性表达。结果:1.对毛发生长的影响:模型组和基质组小鼠毛发生长速度落后于其他组。模型组小鼠皮肤开始变黑的时间落后于空白组,P<0.01。模型组小鼠毛发长出皮表的时间落后于空白组,P<0.01。2.对毛囊的影响:空白组、模型组、基质组毛干色素浅甚至无,毳毛较多;阳性对照组可见毛干色素深的终毛,以毳毛为主;实验组以毛干色素深的终毛为主。模型组小鼠毛囊数量比空白组少,P<0.01;模型组和基质组小鼠毛囊数量无差别,P>0.05;阳性对照组、实验组小鼠毛囊数量明显比模型组多,P<0.001;实验组小鼠毛囊数量比阳性对照组多,P<0.01。模型组和基质组小鼠终毛/毳毛比值无差别,P>0.05;阳性对照组、实验组小鼠终毛/毳毛比值比模型组高,P<0.01,P<0.001。3.WB结果显示:模型组(M)Wnt10b蛋白表达比空白组(B)少,P<0.01;实验组(E)Wnt10b蛋白表达比M组多,P<0.01。E组GSK-3β蛋白、DKK1蛋白表达比M组少,P<0.01,P<0.001。E组CD34蛋白表达比M组多,P<0.05。E组Integrinβ1蛋白表达比M组多,P<0.001;E组Integrin β1蛋白表达比阳性对照组(PC)多,P<0.001。4.IF结果显示:Wnt10b主要表达在毛囊内根鞘,阳性对照组和实验组均可见表达,尤以实验组表达最强;β-catenin主要表达在毛囊内根鞘、基底部,基底部表达最强烈,空白组、模型组只表达在基底部,而实验组在毛囊内根鞘、基底部均可见表达,且表达最强;LEF1主要表达在毛囊内根鞘,仅实验组可见些许毛囊有所表达;c-Myc主要表达在毛囊外根鞘、内根鞘,仅实验组可见微弱表达。CK15在毛囊外根鞘和表皮有些许表达,以实验组表达较多;Integrin β1主要表达在毛囊内根鞘,以实验组表达较多。结论:1.使用DHT 5mg/kg/d皮下注射制作雄激素性脱发小鼠模型是成功的。2.龟板酊具有增加毛囊数量,促进终毛生长,减少毳毛数量的作用,升高终毛/毳毛比值。3.龟板酊可能是通过促进分泌Wnt10b配体触发激活毛囊干细胞中的Wnt/β-catenin信号通路,抑制由DHT激活的负调节因子GSK-3β和DKK1的表达,使信号传导顺利,启动毛发周期,激活毛囊干细胞,促进毛囊干细胞增殖,从而发挥促进雄激素性脱发模型小鼠毛发毛囊生长的作用。