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含单一手性中心的化合物对映体物理化学性质相似,但是药理学和毒理学可能完全不同,构型之间药效相差有时非常大,而含多手性中心化合物具有多个手性中心,不同异构体情况更为复杂,多手性中心药物的手性分离分析仍然是一个巨大的挑战。逆流色谱是一种连续的不需要固体载体的现代色谱分离技术,相比高效液相色谱而言,可避免分离过程中带来的不可逆吸附,广泛应用于天然产物中活性物质的分离。逆流色谱由于分离柱理论塔板较低,在手性分离中的应用研究报道相对较少,但由于逆流色谱是一种容易放大分离的制备色谱,近年来在手性分离领域的报道逐年增多。本文主要在课题组前期基础上,研究了逆流色谱立体选择性分离双手性中心药物及其中间体,包括β-受体阻滞剂类药物、抗抑郁药帕罗西汀及其前体以及非甾体抗炎药洛索洛芬的重要中间体2-（4-溴甲基苯基）丙酸,主要涉及常规逆流色谱、pH区带逆流色谱和闭路循环逆流色谱三种模式。主要内容如下:（1）基于酒石酸酯-硼酸配位为手性试剂,首次实现了逆流色谱分离双手性中心化合物。4种β-受体阻滞剂类化合物在高速逆流色谱上通过常规洗脱模式得到手性分离,其中2种为双手性中心化合物。通过液-液萃取拆分筛选化合物的逆流色谱拆分最佳条件,确定两相体系为氯仿:含0.1 mol L-1硼酸的0.05 mol L-1醋酸三乙胺缓冲液（1:1,v/v）,其中氯仿中含有0.1 mol L-11 L-酒石酸正己酯,20 mg-42 mg外消旋化合物对映体得到手性分离,对映体纯度达到96%-98%,回收率达到87%-93%,首次实现了采用高速逆流色谱分离双手性中心化合物。同时,筛选得到大赛璐Chiralpak IE手性色谱柱,建立了待分离的2种双手性中心目标化合物的手性分析方法。（2）采用pH区带逆流色谱分离2种β-受体阻滞剂类化合物,通过液-液萃取拆分确定pH区带逆流色谱手性分离两相体系条件为含0.1mol L-11 L-酒石酸正己酯的氯仿溶液:0.1 mol L-1硼酸水溶液（1:1,v/v）,其中在有机相中加入20 mmol L-1三乙胺作为保留碱,在水相中加入2mmol L-1盐酸作为洗脱酸,50 mg外消旋化合物对映体得到手性分离,对映体纯度高达98%,对映体回收率达到76%-82%。同时,研究并探讨洗脱酸和保留碱对pH区带手性分离的影响。（3）采用常规高速逆流色谱洗脱模式,以羟丙基-β-环糊精为手性试剂分离了双手性中心抗抑郁药（±）-反式-帕罗西汀对映体及其前体（±）-反式-帕罗醇与（±）-反式-甲基帕罗西汀。通过液-液萃取拆分实验筛选最佳逆流色谱拆分条件,确定两相体系条件为乙酸正丁酯:含有0.1 mol L-1羟丙基-β-环糊精的0.1 mol L-1碳酸钠-碳酸氢钠缓冲溶液（1:1,v/v）,pH=9.2,20 mg（±）-反式-帕罗醇与（±）-反式-甲基帕罗西汀对映体得到手性分离,纯度到达95%-98%,回收率达到70%-83%。20 mg（±）-反式-帕罗西汀在两相溶剂体系正己烷:乙酸正丁酯:含有0.1 mol L-1羟丙基-β-环糊精的0.1 mol L-1碳酸钠-碳酸氢钠缓冲溶液（9:1:10,v/v/v）,pH=9.2,20 mg（±）-反式-帕罗西汀经过逆流色谱闭路循环洗脱得到5.6mg对映体,纯度大于99%。实验发现（±）-反式-甲基帕罗西汀与（±）-反式-帕罗西汀逆流色谱出峰顺序与对映体洗脱行为均有所区别,可能是六氢吡啶环上的基团对两者有所影响。（4）采用逆流色谱闭路循环洗脱模式,以羟丙基-β-环糊精为手性试剂手性分离了洛索洛芬重要中间体2-（4-溴甲基苯基）丙酸,建立了2-（4-溴甲基苯基）丙酸的手性分析方法,通过液-液平衡手性萃取技术优化了逆流色谱手性分离的两相溶剂体系为正己烷:乙酸正丁酯:0.1 mol L-1柠檬酸缓冲液pH=2.4（8:2:10,v/v/v）,水相含0.1 mol L-1羟丙基-β-环糊精,50 mg 2-（4-溴甲基苯基）丙酸得到手性分离,对映体纯度高于99.0%,ee值达到98.0%,回收率在40.8%-65.6%之间,制备分离后获得16.4 mg（S）-对映体,10.2 mg（R）-对映体。洛索洛芬在相同的溶剂体系下无法得到手性分离,需要进一步筛选溶剂体系和手性试剂。