【摘 要】
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该论文采用基因工程手段,利用外源抗病基因,构建植物表达载体,导入桉树细胞基 因组,以期获得抗青枯桉树转基因工程株系.主要研究内容如下:以甜瓜基因组DNA为模板 ,PCR利用技
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该论文采用基因工程手段,利用外源抗病基因,构建植物表达载体,导入桉树细胞基 因组,以期获得抗青枯桉树转基因工程株系.主要研究内容如下:以甜瓜基因组DNA为模板 ,PCR利用技术扩增获得甜瓜ACC氧化酶基因家族成员CM-AC01的前导顺式元件,长度为886bp,将其克隆至pGEM-T Easy载体上.为进一步提高抗菌肽B基因在导入植物后的抗菌效果,根据天然抗菌肽构效关系,以谢毅合成的抗菌肽B为模板,利用PCR技术,删除5端和3端Val、Asn的密码子,增加5端植物核糖体结合位点,在起始密码子ATG后换用植物偏爱密码子GCT, 更换酶切位点,同时构建植物表达载体.利用三个寡聚核苷酸单链互为引物与模板,PCR扩 增技术合成全长207bp的新型抗菌肽基因,克隆于pGEM-T Easy载体上,经DNA序列证实,合 成的SB嵌合基因碱基序列符合设计要求,并构建植物表达载体.构建人溶菌酶植物表达载体及用SB嵌合基因和人溶菌酶cDNA构建双价植物表达载体,以期达到协同杀菌作用.三亲交配法将重组质粒pLSB导入根癌农杆菌ABI,菌落原位杂交、农杆菌双元载体中Mini-Ti质粒DNA 酶切与PCR检测均表明转化后的农杆菌带有完整目的的基因片段,能够用于转化植物.
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