论文部分内容阅读
此项研究中建立了用于定量测定羊关联性恶性卡他热(Sheep-associated malignant catarrhl fever,SA-MCF)病毒DNA的一步法竞争性聚合酶链反应(Comppetitive polymerase chain reaction,cPCR)方法.该分析中采用由一固定含量的待测目的DNA(Target DNA)分别与一系列已知含有不同含量的竞争性模板DNA(Competitor)同时扩增,经40次扩增后,在30-300,000 DNA拷贝范围内,目的DNA与竞争性DNA之间其扩增产物具有明显的线性竞争关系(r=0.98),将具有相同拷贝数量的一对目的DNA和竞争性DNA样品分成几组,分别做不同扩增次数的同步扩增,来测定目的DNA和竞争性DNA的扩增效率,结果表明,直到扩增数达到40次,两种不同DNA的扩增产物随着扩增数的增中,一直是呈稳定持续的增长,每组二种DNA的扩增产物无明显可见的差异,将不同动物和不同组织的DNA样品随机进行分装和编号,然后用该cPCR反复盲测其单位质量总DAN中所含病毒DNA的拷贝数量,由此对cPCR方法的重复进行评价,研究结果表明,所建立的cPCR分析方法具有可靠性和重复性,可以用于来自于SA-MCF感染或患病动物多种不同样品中特异性DNA的定量分析.该研究没能证实成年羊鼻道分泌物和外周血淋巴细胞中病毒DAN水平具有任何明显的季节性变化,从而难以为MCF临床病历主要发生于产仔期这一被普遍接受的看法提供基础性数据.