论文部分内容阅读
目的：研究p53基因在亚砷酸钠(NaAsO<,2>)致人胚胎肺成纤维细胞(HELF)凋亡中的作用；
方法：首先，采用Real-time PCR法及免疫组织化学SABC法，分别从mRNA和蛋白水平检测：0、3、9、和15μmol/L NaAsO<,2>染毒24小时HELP的p53基因表达改变；然后，利用RNAi技术建立p53基因低表达细胞，用Real-time PCR法及免疫组织化学SABC法分别从mRNA和蛋白水平证实其p53基因表达降低；最后，用流式细胞仪(FCM)检测不同组(p53基因低表达细胞组、对照细胞组、正常细胞组)、不同浓度(0、3、9、和15 μmol/L)NaAsO<,2>染毒24小时细胞早期凋亡率，并用Real-time PCR法及免疫组织化学SABC法分别检测其凋亡相关基因：bax、bcl-2表达，比较不同组间结果的差异，探讨p53基因在NaAsO<,2>致HELP凋亡中的作用；
结果：1．3、9、和15μmol/L NaAsO<,2>染毒24小时HELP p53基因表达均明显较0μmol/L NaAsO<,2>染毒24小时的表达增高，差异有意义(P<0.05)，且随着染毒剂量的增加，表达随之增高，二者存在剂量一效应关系(P<0.01)； 2．p53基因低表达细胞组、对照细胞组、正常细胞组细胞的IC<,50>(μmol/L)分别为：28.80±0.68、43.10±1.33、43.43±1.49，p53基因低表达组与其它两组差异均有意义(P<0.05)，对照与正常组间的差异无意义(P>0.05)；3．在同一组细胞中，随着染毒剂量的增加，细胞凋亡率均随之增高，bax基因表达也均随之增高、bc1-2基因表达随之降低，之间差异均有意义(P<0.05)；在不同组中，不同的染毒剂量(0μmol/L时除外)产生相同的结果，即在同一染毒剂量下，p53基因低表达细胞组细胞凋亡率较正常细胞组及对照细胞组的凋亡率明显增高，差异有意义(P(0.05)，对照与正常组间的差异无意义(P>0.05)，然而，p53基因低表达细胞组bax基因的表达水平较正常细胞组和对照细胞组低，差异均有意义(P<0.05)，对照与正常组间的差异无意义(P>0.05)；
结论：
1．NaAsO<,2>能增加HELP的p53基因表达，且随着染毒剂量的增加，表达随之增高，二者存在剂量一效应关系；
2．p53基因减少了NaAsO<,2>致HELP的凋亡，可能是通过改变部分凋亡途径实现的；
3．p53基因是降低HELP对NaAsO<,2>毒性敏感性的一个重要因子，其机制可能是通过减少细胞凋亡实现的。