【摘 要】
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猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)引起的猪瘟(Classical swine fever,CSF)是一种多系统、高传染性和具有重要经济意义的疾病,在全球范围内造成巨大的经济损失。探
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猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)引起的猪瘟(Classical swine fever,CSF)是一种多系统、高传染性和具有重要经济意义的疾病,在全球范围内造成巨大的经济损失。探索出经济高效的防控方法在很大程度上取决于对CSFV致病机理的清楚认识。研究发现宿主细胞外被体蛋白Ⅰ(Coatproteincomplex Ⅰ,COP Ⅰ)可参与调控病毒的复制,而且发现COP Ⅰ与CSFV复制有着密切的关系。ADP核糖基化因子GTP酶活化蛋白 1(ADP ribosylation factor GTPase-activating protein 1,ARFGAP1)是 COPⅠ的一个关键调控蛋白,参与COP Ⅰ及网格蛋白包被的囊泡的形成,并且ARFGAP1还在病毒复制过程中发挥作用。CSFVNS5A蛋白是一个与病毒复制密切相关的非结构蛋白,但尚不清楚ARFGAP1是否与NS5A有互作关系。因此,本研究旨在探讨ARFGAP1对CSFV复制的影响及与NS5A的相互作用,获得了以下结果。(1)ARFGAP1正向调控CSFV的复制。用不同浓度ARFGAP1抑制剂(QS11)处理细胞或者同一浓度QS11处理细胞不同时间点后,显著抑制了 CSFV的复制和子代病毒的产生(P<0.05,P<0.01);通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和间接免疫荧光(IFA)检测发现,过表达ARFGAP1显著促进了 CSFV复制和子代病毒的产生,而干扰ARFGAP1则显著抑制了 CSFV复制及子代病毒的产生(P<0.05,P<0.01),说明ARFGAP1能够正向调控CSFV的复制。(2)CSFV感染促进ARFGAP1的mRNA和蛋白表达。应用RT-qPCR、Western blot检测CSFV感染细胞后ARFGAP1的mRNA和蛋白表达量,结果显示CSFV感染会增加ARFGAP1的mRNA和蛋白表达量。(3)ARFGAP1与CSFV NS5A蛋白存在相互作用。免疫共沉淀(Co-IP)发现ARFGAP1与CSFVNS5A蛋白在细胞内存在相互作用,GST pull-down发现ARFGAP1与CSFV NS5A蛋白存在直接相互作用,激光扫描共聚焦显微镜(CLSM)观察到ARFGAP1与CSFVNS5A在细胞内存在共定位现象。综上所述,研究表明宿主ARFGAP1能够促进CSFV的复制,并且与CSFVNS5A存在相互作用。研究结果为了解ARFGAP1对CSFV复制的影响及与CSFVNS5A的相互作用提供了新的科学资料。
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