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目的：ZNF580是由本课题组最初通过LDL诱导人脐静脉内皮细胞克隆得到的一种新的C2H2型锌指蛋白基因，(Genbank注册号：AF184939)。其功能尚不明确，仍在进一步研究中，本实验旨在研究ZNF580基因过表达对大鼠原代血管平滑肌细胞增殖和迁移能力的影响，以及对大鼠颈动脉球囊损伤的修复作用及其可能的机制，为阐明ZNF580基因的功能提供新的实验依据。方法：1构建ZNF580过表达的慢病毒载体Lenti-GFP-ZNF580和空白对照载体Lenti-null，并对过表达载体测序证实构建的正确性。2采用酶消化法提取分离大鼠的原代血管平滑肌细胞，分离出细胞后用含10%胎牛血清的高糖DMEM培养基在37℃、5%CO2、饱和湿度下培养。并用免疫荧光检测血管平滑肌标记性抗原SM-α，对VSMC进行鉴定。3取培养3-8代的原代VSMC，分别用Lenti-GFP-ZNF580（实验组）和Lenti-null（对照组）进行感染,并通过RT-PCR和Western Blot在基因和蛋白水平鉴定ZNF580的表达情况。4通过BrdU掺入实验分析Lenti-GFP-ZNF580转染组（实验组）和Lenti-null转染组（对照组）以及正常VSMC的增殖能力，检测ZNF580基因过表达后对VSMC增殖的影响。5利用Transwell迁移实验检测Lenti-GFP-ZNF580转染组（实验组）和Lenti-null转染组（对照组）以及正常VSMC的迁移能力，分析ZNF580基因过表达后对VSMC迁移能力的影响。6应用大鼠全基因组芯片分析ZNF580基因过表达后VSMC基因表达谱的变化，并用RT-PCR对可能与VSMC增殖、迁移及信号转导途径相关的的差异基因进行验证。7复制大鼠颈动脉球囊损伤模型，损伤局部转染Lenti-GFP-ZNF580（实验组）和Lenti-null（对照组），通过免疫荧光检测ZNF580的表达水平及表达部位，利用HE染色观察各组血管的狭窄情况并通过免疫组化分析各组PCNA的表达情况。结果：1成功构建ZNF580过表达的慢病毒载体Lenti-GFP-ZNF580和空白对照载体Lenti-null，并通过测序验证其序列的正确性。滴度检测显示病毒滴度为1x109UT/ml。2免疫荧光检测血管平滑肌标记性抗原SM-α，证明成功提取大鼠原代血管平滑肌细胞，用不同MOI值（10,50,100）感染VSMC,荧光显微镜下观察，发现当MOI值为100时，细胞转染效率可达到80％以上，因此后续试验都以MOI值为100转染细胞。3BrdU掺入实验显示Lenti-GFP-ZNF580转染组（0.095±0.019）比Lenti-null转染组（0.148±0.025）以及正常VSMC组（0.154±0.02）的增殖能力减弱（P<0.05），Lenti-null转染组与正常VSMC组间没有差异。4Transwell迁移实验结果表明Lenti-GFP-ZNF580转染组（43±7.6）比Lenti-null转染组（82±6.7）以及正常VSMC组（76±8.4）的迁移能力减弱（P<0.05），Lenti-null转染组与正常VSMC组间没有差异。5芯片结果显示转染Lenti-GFP-ZNF580后VSMC的基因表达谱发生广泛变化，其中变化在2倍以上的共有163个（降低147个升高16个），而变化在1.5倍以上的共有718个（降低587个升高131个）。6动物模型HE染色结果显示Lenti-GFP-ZNF580治疗组（中内膜比I/M：1.08±0.31）再狭窄率明显低于Lenti-null（中内膜比I/M：2.95±0.43）对照组（P<0.05）。免疫组化的结果显示治疗组PCNA的表达水平也明显降低。结论：1成功构建ZNF580过表达的慢病毒载体Lenti-GFP-ZNF580,并成功转染至大鼠原代VSMC。2过表达ZNF580可以抑制大鼠原代VSMC的增殖和迁移。3过表达ZNF580可以引起大鼠原代VSMC基因表达谱的广泛变化。4在大鼠颈动脉球囊损伤模型中，损伤局部过表达ZNF580可以抑制内膜的过度增生。