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传染性支气管炎(IB)是一种急性、高度接触性传染病，被世界动物卫生组织（OIE）列为B类疫病。该病毒的血清型众多，变异速度快，交叉保护性差甚没有。IBVZZ2004是从发病肉鸭中分离到的一株以生长和免疫抑制为主要症状的病毒，对雏鸡和雏鸭均易感，与国内的其他IBV毒株存明显差异，尚无有效的疫苗毒进行防控。本实验室通过鸡胚低温诱导传代，获得了一株弱毒株IBVZZ-V35。本试验对该弱毒株的增殖特性、免疫原性进行了研究，并评价了其安全性。 在SPF鸡胚中的増殖特性。通过TaqMan实时定量PCR检测IBVZZ-V35在SPF鸡胚上的增殖情况，结果表明，接种后37.8℃培养，52h~64h病毒的增殖量较高，60h达到峰值，即3.664×106copies/μL，此后逐渐下降；其EID50为10-6.25/0.2mL，比IBVZZV6的EID50(10-4.88/mL)有所上升。 免疫原性研究。IBVZZ-V35最低抗体保护效价，用ELISA检测二免疫鸡只抗体效价，按照鸡只抗体效价1:32、1:64、1:128进行分组，每组5只，用IBVZZV6进行攻毒，观察一周，结果抗体效价1:32、1:64的鸡只表现出明显临床症状，抗体效价1:128的鸡只均无发病现象，确定其最低抗体保护效价为1:128。IBVZZ-V35接种SPF雏鸡，7天后IBVZZV6攻毒，鸡群未见发病，剖检无病变，阳性对照组表现出明显的发病症状，发病率为71.42％，病死率为37.5％，表明该弱毒株免疫后能抵抗强毒株的攻击。IBVZZ-V35接种10日龄SPF雏鸡，2mL/只，共10只，每间隔2周进行免疫，ELISA检测，结果表明：鸡只三免后5天抗体效价均值在1:570，此后逐渐上升，三免后20-50天抗体效价均值较高在1:1360~1:1920，维持较高水平30天，55-75天抗体效价逐步下降，到三免后80天抗体效价均值下降至1:250，抗体效价持续下降，三免后95天抗体效价均值下降到最低保护以下为1:90。兔免疫原性检测：弗氏佐剂乳化浓缩的病毒，每间隔2周进行免疫，三免后7天采血，间接ELISA测兔血清抗体效价，检测结果80％（4/5）在1:3200。交叉保护性试验：IBVZZ-V35弱毒株接种SPF雏鸡，二免后7天，接种IBV D株、IBV G株、IBV BJ株进行攻毒，观察2周，鸡只均未发病，剖检无病变，RT-PCR检测IBV M基呈阳性，表明IBVZZ-V35能够保护IBV D株、IBV G株、IBV BJ株的感染，具有良好的交叉保护性。 安全性试验。接种IBVZZ-V35的SPF鸡只与未接种的SPF鸡进行混养感染，一周后鸡只均无发病症状，RT-PCR均可扩增出M基因。IBVZZ-V35在SPF雏鸡中连续传至20代，每代鸡只均无发病现象，RT-PCR均可扩增出病毒的M基因，选择5代、10代、15代、20代，继续观察至45日龄，亦无发病现象。S1基因进行核酸序列和氨基酸序列分析均未变异。 结果表明，通过低温诱导鸡胚传代获得IBVZZ-V35弱毒株，在SPF鸡胚上具有良好的增殖特性，对鸡和家兔均具有良好的免疫原性，生物安全性好，该弱毒株具备疫苗毒主要特性。