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DC是目前己知的功能最强的专职抗原提呈细胞,具有刺激初始T细胞增殖的独特功能。DC分为髓样DC(myeloid-DC,mDC)和浆细胞样DC(plasmacytoid-DC,pDC)两大亚群,分别由骨髓CD34~+干细胞、外周血单核细胞以及淋巴细胞等在粒一巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage clony-stimulating factor,GM-CSF)的诱导下分化而来。基于DC的重要功能和在机体特异性免疫中居于的关键地位,本课题以BALB/c小鼠为研究对象,对7肽诱导小鼠DC细胞免疫应答模式及其机制进行了初步研究。课题分为三部分。(一)小鼠骨髓来源DC细胞培养在本研究中,我们首先对小鼠骨髓来源的DC进行制备,主要描述了小鼠的骨髓细胞作为DC的前体细胞的采集、单核细胞分化为DC、表型评价。结果显示:此方法培养的细胞其表面CD11c的表达率超过80%,具有典型的DC形态。结论:利用此法能在体外培养出大量的未成熟DC,为研究模拟肽诱导小鼠DC细胞免疫应答机制奠定了基础。(二)模拟肽诱导小鼠DC细胞免疫应答的研究经7肽免疫10天的小鼠,取脾细胞,分选CD4~+T及CD~+8T细胞与经过7P负载并成熟DC细胞共孵育24小时,收集上清,应用流式细胞技术方法检测上清细胞因子。结果表明,实验组中CD8~+T上清中IFN-γ、TNF-α、IL-10及IL-6较对照组有所升高,CD4~+T上清中TNF-α降低;IL-5、IL-2及INF-r均升高,均具有统计学意义。结论:7肽能诱导以CD8~+T及Th1细胞为主的细胞免疫。(三)模拟肽诱导免疫应答机制的初步研究为了解体内7P免疫激活及调节途径,应用基因组表达谱芯片、RT-PCR以及Western blot等方法检测了免疫后小鼠脾细胞mRNA的表达水平以及蛋白的表达情况。在基因组表达谱芯片中:实验组GP1BB,HP,F13A1,F2RL2,GP5,F10,4VWF表达量增多,基因TNFRSF13C,SYK,TCRB-V13,FGD4,IGH-6,PDE4B,SOCS3,JAK1,TNFSF13B,CD4表达量则下降。RT-PCR结果提示:试验组syk,Jak和Tnfsf13b的mRNA表达水平降低,IFN-γ、IL-2和IL-10的mRNA表达水平升高。Western Blot提示:试验组SYK蛋白表达降低,而IFN-γ蛋白表达增高。结论:7肽可能诱导以CD8~+T及Th1细胞为主的细胞免疫,并且通过如SYK、Jak和Tnfsf13b等基因和蛋白的调控作用,在免疫应答的过程中抑制炎症反应,维持免疫应答在一定程度的发生。