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选题依据:黄芪建中汤出自东汉张仲景《金匮要略》,由七味药(黄芪、白芍、甘草、桂枝、生姜、大枣和饴糖)组成,是益气建中的经典方剂,主要用于补脾益气,治疗“虚劳里急,诸不足”。现代临床多用于治疗如脾虚性慢性萎缩性胃炎和十二指肠溃疡等胃肠道等疾病,是治疗虚寒性胃病的主方。但其体外化学物质组成及体内吸收代谢情况尚不明确。此外,中药只有在某一证候存在的情况(机体处于特定病理状态)下,才能体现药效。对疾病状态下体内代谢成分的辨识才能更为科学地反映黄芪建中汤的物质基础。因此,为阐明该方的效应化学成分(群),尤其是疾病状态下,体内外化学成分研究非常有必要。目的:建立全面的黄芪建中汤化学成分谱,并对黄芪建中汤成分的体内代谢以及其作用机制进行分析,系统全面阐释黄芪建中汤的化学成分及其代谢调控机制,为黄芪建中汤基于效应物质的质量评控研究及临床合理应用提供科学依据。方法:(1)黄芪建中汤体外化学成分谱的建立及成分分析本研究首先应用液质联用的手段以及药物分析的方法,采用高分辨质谱分析构建黄芪建中汤化学成分谱,根据化学成分的结构信息及其质谱裂解规律信息,结合并数据库及文献报道,全面分析黄芪建中汤体外的化学组成。(2)生理状态下黄芪建中汤血中移行成分的研究依据上述建立的黄芪建中汤体外化学成分的分析方法,对正常大鼠口服黄芪建中汤的血浆样本进行体内成分代谢分析。通过多次给予SD大鼠高剂量黄芪建中汤(36.8 g/kg)后,采集肝素钠血浆样本,通过乙酸乙酯液液萃取法结合甲醇蛋白沉淀法进行血浆样品前处理,应用Compound Discover 2.0软件进行数据分析,根据保留时间、精确分子量及特征碎片离子进行验证鉴定,分析复方在正常生理状态下的原型化合物及其代谢产物。(3)生理状态下与病理状态下黄芪建中汤血中移行成分的差异分析本研究采用代谢组学结合药物分析技术,分析正常对照组、正常大鼠复方干预组、模型组(慢性萎缩性胃炎病理模型)和模型大鼠复方干预组四组大鼠血浆的内源性代谢轮廓变化差异,识别复方发挥疗效的相关生物标志物。同时应用体内代谢分析和多元统计分析方法分析正常和病理状态下复方的体内代谢谱,分析其在两种机体状态下的代谢差异;最后采用相关分析将内源性代谢与复方代谢关联分析,锁定复方的有效成分(群)及其相关的代谢靶点。结果:(1)体外化学成分鉴定结果:在黄芪建中汤体外成分谱中共指认出包括黄酮、皂苷、萜类等共71种成分。其中黄芪的成分有20种、白芍14种、甘草37种、生姜3种、桂枝大枣各2种,这些成分构建了黄芪建中汤全面的体外化学成分谱,为其体内研究奠定基础。(2)生理状态下体内化学成分鉴定结果:识别原型成分11个,相关代谢产物55个。结果显示,黄芪建中汤入血成分主要有黄酮及其苷以及五环三萜皂苷类成分,在体内发生的生物转化主要包括甲基化、乙酰化、硫酸化等体内反应。(3)将正常对照组-模型组两组进行比较,筛选并指认出模型大鼠血浆中氨基酸、脂肪酸等20个与慢性萎缩性胃炎密切相关的内源性代谢差异物,与氨基酸代谢途径、脂肪酸代谢以及肠道菌群紊乱有关;同时,将正常对照组-正常大鼠复方干预组两组进行比较,筛选及鉴定到8个内源性代谢产物、13个原型成分及相关的21个代谢产物,吸收的原型成分主要包括黄芪及甘草中的黄酮及相应皂苷、白芍中单萜类等,代谢的反应涉及氧化、还原、结合反应等;将模型组-模型大鼠复方干预组两组进行比较分析,得到11个内源性代谢物、原型成分11个及相关代谢产物13个,原型成分的吸收比正常对照组的吸收少了Cinnamic acid、Ononin,参与的代谢反应基本相同;最后,将正常大鼠复方干预组-模型大鼠复方干预组两组进行多元统计分析,筛选并指认得到3个内源性代谢物、3个原型以及7个代谢产物。通过进一步的相关分析,Mudanpioside F、Methoxycinnamic acid、5-Hydroxylliquiritin、6-Shogaol、Liquiritin、Isoliquiritigenin、Gallic acid、Calycosin、Paeoniflorin、Isoliquiritin apioside、Formononetin及相关代谢产物与慢性萎缩性胃炎病理标志物相关度较高,为其干预CAG的潜在药效物质基础。结论:本研究基于体内外化学成分分析以及多元统计分析研究正常大鼠与模型大鼠对黄芪建中汤的吸收与代谢的差异。得到黄芪建中汤防治慢性萎缩性胃炎潜在效应成分(群)。本研究为明确黄芪建中汤的体内生物转化特点以及体内作用过程提供了依据,也为后期黄芪建中汤防治慢性萎缩性胃炎有效成分的遴选提供了参考依据。