论文部分内容阅读
基因治疗是治疗神经胶质瘤有效方法之一,胸苷激酶(thymidine kinase,TK)能够将无毒的前体药物更昔洛韦(ganciclovir,GCV)转变为细胞毒性物质更昔洛韦三磷酸(ganciclovir triphosphate,GCV-TP),从而干扰DNA合成,使DNA复制终止细胞死亡。除此之外,GCV/TK还呈现旁观者效应。目前主要以病毒载体和干细胞介导TK表达,但病毒载体存在安全隐患,干细胞有其应用的局限性。聚乙烯亚胺(polyethyleneimine,PEI)为非病毒类基因载体,具有优越的基因传递性能,常被用于基因转染,通过在PEI表面引入靶向基团可以实现主动靶向。本研究首先通过慢病毒介导TK表达,发现GCV/TK能够有效抑制HEK293T和胶质瘤SHG44的增殖,呈现出GCV浓度依赖和时间依赖效应。比较细胞增殖抑制率发现,表达TK的HEK293T和SHG44细胞,GCV的IC50分别为53.0μM,和15.49μM,表明胶质瘤细胞对GCV/TK具有更好的敏感性。进一步,将表达TK与未表达TK的SHG44细胞按1:1的比例混合培养,GCV处理后,未表达TK的SHG44也死亡,表明GCV/TK在胶质瘤中有旁观者效应。进一步,体内荷瘤研究表明,GCV/TK能抑制肿瘤的增殖。为了避免病毒载体可能出现的安全隐患,引用了非病毒类基因载体PEI-PEG。结果表明,PEI-PEG能介导TK在U87MG中表达,有效表达的TK使GCV转化为GCV-TP,产生细胞毒性,抑制细胞增殖。为了能够更好的实现脑靶向,在PEI-PEG上键合脑靶向基团Angiopep、引入胶质细胞特异启动子GFAP,这些策略都有效介导TK的表达使GCV转化为GCV-TP,从而抑制肿瘤细胞增殖,这些工作表明PEI-PEG不仅具有良好的基因传输性能,还可以实现组织特异性表达。目前,我们建立了U87MG-Luc脑胶质原位瘤模型,为更好的研究PEI-PEG-Angiopep介导TK实现组织特异性表达,使GCV转化为GCV-TP抑制胶质原位瘤提供了平台。