鼠舌白斑癌变及复方中药防治的基因基础研究

• 作 者: 葛姝云
• 机 构: 上海交通大学
• 出 处: 上海交通大学
• 发表日期: 2006年期
• 关键词: 口腔白斑 癌变过程 基因表达 复方中药 实验药理

口腔黏膜白斑是一种公认且常见的癌前病变，癌变率在10-30％之间，其癌变是一个多基因多步骤参与过程。由于癌变机制不甚明了，迄今为止，对于白斑癌变仍缺乏特效的防治措施。应用中药延迟、抑制癌发生是癌化学预防领域一个极具前景的研究方向。但中药作用多靶点、多途径、多环节的复杂性，既是优势所在，也是其药理作用研究的瓶颈。而具备高通量并行分析特点的生物芯片技术，为快速全面把握疾病发病机制，探讨中药作用机理提供了新思路。　　目的:　　1)通过动态观察白斑癌变过程中基因谱的变化，获得白斑癌变相关靶基因，从而较全面地揭示白斑癌变的分子机制，为白斑癌变风险监测和药物干预寻找靶标。　　2)比较有效复方中药“复方冬菊”干预白斑癌变前后基因谱的变化，从基因水平揭示中药的作用机制，寻找药效靶基因。　　方法:　　(1)Wistar大鼠85只，随机分为癌变模型组和中药干预组，正常对照组、药物对照组。对9周、13周、20周、24周、32周标本进行分级组织病理诊断。　　(2)采用鼠codelink芯片检测鼠舌白斑癌变5个阶段基因表达谱变化，运用CPP-SOM展示方法、GenMAPP2.0、GO(Gene Ontology)等方法进行数据分析。　　(3)采用鼠codelink芯片检测“复方冬菊”干预鼠舌白斑癌变前后基因谱的改变，运用CPP-SOM展示方法、GenMAPP2.0、GO(Gene Ontology)等方法进行数据分析。　　(4)采用realtimePCR验证部分差异基因表达，PCR产物测序检测P53突变。　　(5)采用免疫组化SP方法检测阳性模型组和中药干预组NB-κB p65，IκBα、clyclinD1蛋白表达。　　结果　　(1)4NQO饮水喂养9、13、20、24、32周，大鼠舌背粘膜组织学上经历了“正常—异常增生—原位癌—癌”的典型病理过程。随着动物口腔粘膜接触致癌剂时间的延长，NF-κB、CyclinD1的阳性表达逐渐升高，而IκBα阳性表达有所下降。NF-κBp65、cyclinD1蛋白表达与病理分级具有相关性（P＜0.01），NF-κBp65和IκBα、cyclinD1蛋白表达无相关性（P＞0.05）。　　(2)CPP-SOM结果显示:轻度和中度异常增生、重度和原位癌、鳞癌之间基因表达谱变化有明显差异，涉及外源性化合物代谢通路异常、TCA循环抑制、P53突变、增殖凋亡失控等多个通路的大量基因表达发生改变。　　(3)芯片检测和Realtime PCR在检测基因表达趋势上一致。P53测序结果表明:第5外显子174密码子发生点突变:TGG—TGC。　　(4)中药干预组舌背粘膜异常增生发生率明显低于模型组，NF-κB p65、CyclinD1的阳性表达率明显也低于模型组(p＜0.05)，丽IκBα阳性表达略高于模型组，但两者无统计学差异。　　(5)“复方冬菊”处理32周后，鼠舌粘膜基因表达谱变化模式与模型组相似，但变化基因范围明显减少。　　(6)”复方冬菊”可调变CDC2、CDK4、C-fos、IL1α、Jak3、NF-κB等多个参与炎症反应、TCA循环、线粒体呼吸链、细胞周期与凋亡、物质代谢等途径的靶基因。　　结论　　(1)CPP-SOM整合基因芯片技术能为研究白斑癌变机制提供稳定可靠的技术平台。　　(2)口腔白斑癌变是一个多阶段、多基因参与过程，涉及细胞周期、细胞凋亡、TCA循环、代谢异常、炎症免疫反应等多种基因。　　(3)“复方冬菊”对实验性口腔白斑癌变有阻断作用，其分子机制为调变了癌变进程的多个靶基因，从而发挥抑制炎症反应、修复TCA循环、抗氧化自由基、线粒体呼吸链激活诱导细胞凋亡、阻滞细胞周期、调整物质代谢等多种作用。