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目的:筛选并验证肺泡Ⅱ型上皮细胞(alveolar typeⅡ epithelial cell，AEC-Ⅱ)凋亡相关microRNA(miRNA)。
方法:(1)模型建立:分离、纯化、鉴定并原代培养AEC-Ⅱ36h，0.5mmol/L H2O2诱导建立AEC-Ⅱ凋亡模型。(2)凋亡检测:分别于建模前(T0)、建模后2.5h(T2.5)、6h(T6)、12h(T12)及24h(T24)收集细胞，流式细胞术(FCM)检测细胞早期凋亡率，透射电子显微镜(TEM)检测细胞凋亡形态。(3)基因芯片筛选凋亡相关miRNA:分别于T0及T24收集细胞行miRNA芯片检测，比较两个时间点miRNA表达谱的差异，并从差异表达的miRNA中筛选凋亡相关miRNA。(4) Real-time PCR验证凋亡相关miRNA:选取3个凋亡相关miRNA行Real-time PCR检测，以验证基因芯片结果的准确性。(5)生物信息学方法预测靶基因:综合运用TargetScan、miRecords、TarBase、miRTarBase预测经验证的miRNA的靶基因，并从预测结果中筛选凋亡相关靶基因。
结果:(1) TEM鉴定AEC-Ⅱ:可见特征性的微绒毛及嗜锇性板层小体。(2) TEM检测细胞凋亡形态:可见胞质回缩，染色质凝聚、边聚，细胞表面微绒毛稀少，嗜锇性板层小体排空。(3) FCM检测细胞早期凋亡率:H2O2建模后细胞凋亡率显著增加，且随建模时间延长而逐渐上升。(4)基因芯片筛选凋亡相关miRNA:与T0相比，T24细胞伴有多种miRNA的差异表达:28个miRNA表达明显上调，10个miRNA表达明显下调，其中rno-miR-449a-5p、rno-miR-34b/c-5p、rno-miR-200a/c-3p及rno-miR-21-5p等13个miRNA与凋亡密切相关。(5) Real-time PCR验证凋亡相关miRNA:选取rno-miR-449a-5p、rno-miR-34c-5p、rno-miR-21-5p进行Real-time PCR检测，三者表达水平均明显下调，结果与芯片结果一致。(6)生物信息学方法预测靶基因:选取rno-miR-449a-5p、rno-miR-34b/c-5p、 rno-miR-21-5p进行靶基因预测，预测结果提示:rno-miR-449a-5p的靶基因可能是Cene2; rno-miR-34b/c-5p的靶基因可能是Bcl2; rno-miR-21-5p的靶基因可能有Bcl2、Pdcd4、PTEN及Fasl。
结论:(1)筛选并验证了AEC-Ⅱ凋亡相关miRNA。(2) miR-34家族可能是AEC-Ⅱ凋亡调控的主要参与者。(3) rno-miR-21-5p可能是AEC-Ⅱ内重要的抗凋亡基因。