SPATA12基因的转录调控机制研究

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SPATA12是一个人类生精相关新基因。已有的研究表明,SPATA12主要在减数分裂后期的精子分化成熟阶段起作用,参与抑制细胞的增殖和/或维持细胞的分化,但其转录调控的分子机制目前尚未阐明。  本研究首先运用生物信息学分析方法预测了SPATA12基因的启动子区域及可能与转录因子SRY、SMAD、AP-1、HSF和GCR-1等结合的位点。接着,分别构建了含SPATA12基因启动子不同截短序列的荧光素酶报告基因表达体系,结果显示,SPATA12基因启动子的核心区域定位于77bp~+302bp处。该区域含有1个热休克转录因子HSF的结合位点、1个SRY的结合位点和1个AP-1结合位点。并且,AP-1位点定点突变和缺失突变的荧光素酶实验证明了AP-1位点的存在对于SPATA12启动子活性是必要的。进一步的研究还证实,SPATA12可通过其启动子序列上的smad3/4与AP-1识别位点应答外源性TGF-β1信号的刺激,且SPATA12的表达水平与TGF-β1的剂量呈正相关。另外,研究还发现热激处理能够诱导Hela细胞中SPATA12的重新表达,提示了SPATA12启动子上的HSF结合位点能够响应环境中的热诱导。  同时,应用基因芯片和Real-time PCR技术研究了SPATA12参与的关键信号转录调控通路,发现SPATA12作用于GC-1 spg生殖细胞系后,表达上调的基因有182个,表达下调的基因有104个。进一步的实验发现,SPATA12能显著下调Wnt通路关键基因β-catenin及其下游靶基因cyclinD1、cyclinE1的表达,阻滞细胞周期进程,提示SPATA12可通过Wnt/β-catenin信号途径发挥抑制细胞增殖的作用。  因此,我们的初步研究认为,SPATA12基因的转录水平分别受AP-1、TGF-β1/Smad、热激的调控,并且SPATA12基因可通过Wnt/β-catenin信号通路发挥抑制细胞增殖的作用。这项研究结果为阐明SPATA12基因的分子调控机制奠定了基础。
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