论文部分内容阅读
本实验室在前期研究中已经克隆了玉米大斑病菌Fus3/Kss1-homolog MAPK级联途径下游的一个转录因子基因StSTE12,并获得了3株该基因的不同沉默程度RNAi转化子。本研究在此基础上利用生物信息学技术,明确了StSTE12在基因组中的位置并解析了StSte12蛋白质的结构特征;并在分析酿酒酵母ScSte12转录因子的下游调控基因的基础上,从玉米大斑病菌基因组数据库中筛选得到了ScSte12的同源基因;以玉米大斑病菌StSTE12基因RNAi转化子为实验材料,利用RT-PCR和Real-time PCR技术,分析这些基因的表达规律,最终确定玉米大斑病菌转录因子StSte12可能的下游调控基因。本试验的主要研究结果如下:
1.利用生物信息学方法,确定了玉米大斑病菌StSTE12基因位于scaffold_13正链的1061747-1064127,其ID为105656;该基因的编码蛋白具有Ste12-1ike蛋白所特有的保守结构域(STE homeodomain和ZnF C2H2锌指结构)及空间结构。
2.利用Western blotting技术,分析了玉米大斑病菌在菌丝发育、分生孢子形成及附着胞形成等不同发育时期StSte12蛋白的表达情况。结果表明,Stste12蛋白在附着胞形成时期的表达量最大。
3.通过搜索酿酒酵母基因组数据库,得到了酿酒酵母中受转录因子ScSte12调控的下游靶基因;进一步查询玉米大斑病菌基因组数据库,获得了上述所有基因的同源基因;通过对StSte12下游靶基因的结构特征进行分析,发现所有基因均具TCGAAAC AG的匹配序列,其中间部分GAAAC为高度保守的序列。
4.利用RT-PCR和Reai-time PCR技术对StSTE12基因RNAi转化子进行分析,结果初步证实转录因子StSte12的下游调控基因为StBEM2、StBUD8、StCHS7、StPCK1、StKAR5、 StBEM1、 StSHO1。