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目的:研究证实癌基因的扩增是导致多种肿瘤发生发展的重要因素之一，探索癌基因的扩增和扩增后对肿瘤细胞影响的机制不仅能够加深我们对癌症的理解，还对临床诊断与治疗有着重要的意义。Rsf-1(Remodeling and spacing factor-1)基因位于染色体区域11q13.5，已经发现该区域的某些基因存在扩增现象并与恶性肿瘤密切相关。研究显示在多种上皮恶性肿瘤中存在Rsf-1的异常过表达，同时Rsf-1基因在卵巢癌与乳腺癌等中存在明显扩增，并且已被证实该基因的扩增不仅与肿瘤患者的预后明显相关，并且具有促进肿瘤细胞增殖、侵袭的能力。更重要的是，在卵巢癌中Rsf-1的过表达和基因扩增已被作为预后不良的标志。 肺癌的发病率和死亡率增长很快，居恶性肿瘤之首，肾癌的发病率也呈逐年上升趋势，二者严重威胁人类健康和生命。在肺癌和肾癌中都存在11q13区域基因扩增现象，但Rsf-1基因的表达情况及其意义尚不清楚。本实验通过检测Rsf-1在肺癌和肾癌中的表达情况，分析其表达与临床病理因素及预后的相关性，同时检测Rsf-1对肺癌增殖、凋亡能力的影响，探讨其与肿瘤恶性表型相关性及可能的分子机制。 研究方法:1.收集中国医科大学附属第一医院行外科手术切除经病理证实为原发性肺癌的石蜡包埋组织98例及原发性肺癌的新鲜肺癌组织及对应癌旁肺组织25例。另收集中国医科大学附属第一医院行外科手术切除经病理证实为原发性肾癌及对应癌旁肾组织石蜡包埋组织137例。2.免疫组织化学染色检测抗Rsf-1单克隆抗体在配对肺癌、肾癌及癌旁组织中的蛋白表达差异并进行统计学分析，分析其表达与肺癌、肾癌临床病理因素的关系。3.Real-time PCR(SYBR Green法)检测配对25例新鲜肺癌组织及对应癌旁肺组织Rsf-1mRNA表达差异4.细胞培养:培养人肺癌H1299、A549、SPC、H157、LK2、H460细胞系以及正常人支气管上皮细胞HBE细胞系，用含10％热灭活新鲜小牛血清、100U/ml的青霉素、100U/ml的链霉素的RPMI1640培养基，在37℃、5％CO2的条件下培养。5.Western Blot法检测肺癌细胞系及正常支气管上皮细胞蛋白表达Rsf-1蛋白表达差异;SiRNA干扰过表达Rsf-1肺癌细胞系内源性Rsf-1水平，real-time PCR验证干扰效率。接续再检测过表达Rsf-1蛋白肺癌细胞系干扰前后p-ERK、p-AKT及CyclinD1等蛋白表达情况变化，以及过表达Rsf-1蛋白肺癌细胞系干扰前后Bcl-2及p-IκB蛋白表达情况变化。6.集落形成试验检测过表达Rsf-1蛋白肺癌细胞系的干扰前后增殖能力变化。7.流式细胞术检测过表达Rsf-1蛋白肺癌细胞系的干扰前后细胞各周期数目变化及凋亡情况变化。8.荧光素酶报告基因检测过表达Rsf-1蛋白肺癌细胞系的干扰前后NF-κ B荧光素酶活性。9.采用SPSS10.0统计分析软件，对Rsf-1过表达和临床病理因素的关系用卡方检验，分析Rsf-1过表达与预后的关系采用K-M曲线法和单因素及多因素COX回归分析法，P＜0.05为差异有显著意义。 结果:1、 Rsf-1在肺癌中过表达并与低分化和高p-TNM分期相关。实时定量PCR检测结果发现有84％(21/25)病例肺癌组织中Rsf-1的mRNA含量明显高于癌旁肺组织，差异具有显著性（P＜0.001）。本组肺癌组织中Rsf-1的mRNA的平均值是其癌旁正常肺组织均值的2.37倍。免疫组化结果显示在68.4％(67/98)的肺癌组织中表现出Rsf-1蛋白的过表达，进一步的分析我们发现Rsf-1蛋白的过表达与肺癌的高p-TNM分期和低分化存在着显著相关性。2、Rsf-1在肾癌中过表达并与高T分期相关。免疫组化结果显示癌旁肾组织中Rsf-1均为正常表达，而在肾细胞癌组织中Rsf-1的过表达率为43.1％(59/137)。Rsf-1过表达与肾癌的高p-TNM分期相关（P=0.049），与高T分期显著相关（P=0.003），而与肾癌患者的年龄、细胞核分级、淋巴结转移和远处转移等未发现有明显的相关性。3、Rsf-1在肾癌患者中过表达与不良预后相关。单变量及多变量回归分析的结果显示Rsf-1过表达与肾癌患者不良预后相关。4、Rsf-1过表达的H1299和H460肺癌细胞中，干扰Rsf-1的表达下调肺癌细胞的增殖能力。干扰Rsf-1过表达的H1299和H460细胞的集落形成明显少于对照组(H1299 Con vs si:123±15 vs83±9;H460Con vs si:218±18 vs112±17)，具有统计学差异(P＜0.05)。5、Rsf-1通过ERK/CyclinD1影响肺癌细胞增殖。PI单染检测细胞周期的结果显示，干扰Rsf-1的表达后，G1期细胞的比例增多(H1299 Con vs si:56.2±5％ vs71.0±7％; H460 Convs si:53.1±4％ vs70.0±6％)，S期细胞比例减少(H1299 Con vs si:17.1±2％ vs11.0±5％; H460 Con vs si:19.2±2％ vs10.1±5％)，提示Rsf-1可能通过细胞周期调控来影响肺癌细胞的增殖能力。因此，我们检测了一系列与细胞周期相关的蛋白表达情况，发现干扰Rsf-1后，肺癌细胞cyclinD1的水平明显下调，同时磷酸化的ERK水平明显下调。使用siRNA-Rsf-1与使用ERK抑制剂U0126一样，抑制了肺癌细胞的克隆形成率(H1299 Con vs si vs U0126:123±15 vs83±9 vs88±12; H460 Con vssi vs U0126:218±18 vs112±17 vs162±17)，这提示Rsf-1可能通过ERK通路影响肺癌细胞增殖能力。同时检测两组细胞中磷酸化ERK的水平，Western blot结果表明干扰Rsf-1对pERK的下调与应用抑制剂U0126的结果相似，均明显低于对照组。6、干扰Rsf-1的表达促进肺癌细胞的凋亡。在过表达Rsf-1的H1299和H460细胞中转染Rsf-1-siRNA和对照序列，48hr后将干扰Rsf-1及对照组的H1299和H460细胞采用PI/AnnexinⅤ-FITC双染技术检测细胞的凋亡能力，流式细胞仪检测结果显示，内源性抑制Rsf-1可以促进H1299和H460肺癌细胞的凋亡。7、Rsf-1通过NF-κ B信号通路影响细胞凋亡。western blot检测和荧光素酶报告基因检测技术发现，干扰Rsf-1可以下调bcl-2和p-Iκ B的蛋白表达水平。荧光素酶报告基因检测结果显示干扰Rsf-1可以抑制NF-κ B信号通路的活性。 结论:1、Rsf-1在肺癌中存在过表达并与高p-TNM分期、低分化相关;Rsf-1可通过ERK/CyclinD1通路促进肺癌细胞增殖能力;Rsf-1可通过NF-κ B/Bcl-2通路增加肺癌抗凋亡能力。2、Rsf-1在肾癌中存在过表达且与肾癌高分期及不良预后相关。