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目的:探讨小鼠骨髓间充质干细胞在体外定向分化为神经干细胞的诱导方法,并对CART在诱导其定向分化的中所起作用进行初步探讨。
方法:直接贴壁方法分离培养并纯化小鼠骨髓间充质干细胞,流式细胞仪检测小鼠骨髓间充质干细胞免疫表型对其鉴定,并对其使用EGF+bFGF,EGF+bFGF+BDNF/CART分三组联合诱导传至第三代骨髓间充质干细胞,并设未加诱导因子对照组,及单用CART诱导组,使用免疫荧光方法对分化的神经干细胞进行鉴定,提取细胞RNA,用RT-PCR方法检测骨髓间充质干细胞向神经干细胞分化过程中nestin,BDNF,NGF表达水平。
结果:小鼠骨髓间充质干细胞分离纯化后经流式细胞分析纯度达95%以上,经各联合诱导组诱导后均具有神经干细胞的形态,经免疫荧光检测,各组均能表达nestin,CART+EGF+bFGF组nestin阳性细胞数显著高于其余诱导组,对照组及单用CART诱导组未见nestin阳性细胞,经RT-PCR检测,与对照组相比,各联合诱导组nestin,NGF,BDNF mRNA表达量均显著升高,单用CART诱导组与对照组无明显区别,CART+EGF+bFGF组nestin表达量显著高于其余诱导组(P<0.05),BDNF表达量明显低于其余诱导组(P<0.05)。
结论:小鼠骨髓间充质干细胞体外可定向诱导分化为神经干细胞,EGF+bFGF能促进其诱导分化,使用CART联合诱导能明显提高细胞分化效率,且这一促进诱导分化的作用与抑制BDNF的合成分泌可能有相关性。