牛初乳IgG及其F（ab'）<,2>、Fab片段的DNase活性的研究

• 作 者: 何春艳
• 机 构: 华南理工大学
• 出 处: 华南理工大学
• 发表日期: 2008年期
• 关键词: 牛初乳 牛初乳抗体酶 抗体酶牛初乳IgG 牛初乳IgG脱氧核糖核酸酶 脱氧核糖核酸酶分离纯化 分离纯化凝胶层析法 凝胶层析法

抗体酶(abzyme),又称催化性抗体(catalytic antibody),是指具有催化活性的抗体,它既具有与相应抗原发生免疫反应的活性,又能像酶那样催化某种化学反应。已有研究发现,健康母乳中含有多种具有酶活力的天然抗体。本论文探讨了牛初乳IgG及其F(ab)2和Fab片段的分离纯化与制备,并重点研究了牛初乳IgG及其F(ab)2和Fab片段所具有的脱氧核糖核酸酶(DNase)的性质。牛初乳抗体酶的存在,对于减少机体受到肠道病毒DNA感染的几率可能有重要意义,是对牛初乳功能机制的重要补充。
研究了高纯牛初乳IgG的制备方法,SDS-PAGE不连续凝胶垂直电泳结果显示,蛋白G亲和层析法与葡聚糖G-150凝胶层析法联用所获得的牛初乳IgG样品可达到电泳纯,而且仍具有较高活性。
分别采用胃蛋白酶和木瓜蛋白酶酶解牛初乳IgG的方法,制备含F(ab)2片段和Fab片段的混合物。SDS-PAGE不连续垂直电泳检测证实,经葡聚糖G-150凝胶层析分离可得到较纯的F(ab)2和Fab片段组分。
琼脂糖凝胶电泳结果证实,牛初乳IgG及其F(ab)2、Fab片段均具有水解DNA的性质。随着酶切反应中IgG剂量的增加以及反应时间的延长,牛初乳抗体酶催化的DNA酶切反应更加彻底。
采用增色效应定量测定牛初乳IgG及其片段的DNase酶活力,并初步进行酶特性研究。结果显示,牛初乳IgG及其F(ab)2片段、Fab片段均具有DNase酶活力,最适pH值均在4.0左右,偏酸性,且它们的活性均不依赖于金属离子,进一步证实IgG抗体酶归类于DNase Ⅱ类酶(又称酸性DNase)。