亲和层析与生物质谱联用技术在生物体内蛋白质药物分析中的应用研究

来源 :中国人民解放军军事医学科学院 | 被引量 : 1次 | 上传用户:liongliong554
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重组人内皮抑制素(recombinant human endostatin, rh-ET)具有较强的抑制内皮细胞繁殖和抑制肿瘤的形成和转移的作用,现已作为我国第一个血管抑制剂类基因工程抗肿瘤一类新药经国家药品监督管理局批准,正式进入临床研究。本文以基因重组N-端含有6×His序列标签的内皮抑制素为模型,建立了固相亲和层析与生物质谱联用技术,对给药动物血清中的微量蛋白质药物、体内代谢物和血清蛋白结合物进行富集提取,并鉴定提取的蛋白质药物的方法。为蛋白质药物代谢产物结构分析与蛋白质药物的体内代谢途径研究奠定了基础。 通过氨基酸组成分析、N-端序列分析、质谱分析以及肽质量指纹谱分析等方法对rh-ET的结构进行了确证,并得知其中含有两种组分,其中一种与设计序列一致,另一种在N-末端缺失Met残基。 动物试验表明,rh-ET主要通过小鼠泌尿排泄系统代谢排出,其中尿液总放射性浓度最高,血清低于尿、肾和肺和肝位居第五;尿液中的主要成分是亲水性代谢物等,药物原型含量极低,而血清中药物原型相对较高。 通过固相免疫亲和层析与固相金属螯合层析富集提取了血清中的蛋白质药物及其体内代谢物和体内蛋白结合物,直接对固相亲和层析胶的MALDI-TOF-MS分析得到了它们的分子量信息。分别利用肽质量指纹谱分析和两种电喷雾串联质谱分析结合互联网数据库检索对固相亲和层析提取的蛋白质药物rh-ET进行了识别、鉴定。
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