论文部分内容阅读
植物激活蛋白是一类从多种植物病原真菌中分离得到的新型蛋白质,激活蛋白的核酸和氨基酸序列完全不同于已知的Harpin蛋白和Elicitin蛋白,与数据库中的已知蛋白均无同源性。它通过激活植物体内一系列相关基因,使植株表现出良好的抗病防虫、增强抗逆能力、促进植物生长等生物活性,且性能稳定、易分解、无残留;作为一种新型蛋白质农药,激活蛋白具有广阔的应用前景。为了进一步了解激活蛋白的作用机制,本研究构建了激活蛋白诱导的水稻叶片差异表达基因文库,并对部分基因进行了分析。 抑制性差减杂交(Suppression Subtractive Hybridization,SSH)是一种分离差异表达基因的技术。该技术以差减杂交和抑制性PCR为基础,可快速有效地分离出差异表达基因,假阳性率低,效率较高,广泛用于生物及医学领域差异基因的克隆。 本研究采用从稻瘟菌(Magnaporthe griesea)中分离纯化出的激活蛋白,利用SSH技术,以激活蛋白处理的水稻作为处理组(tester),空白对照作为对照组(driver),构建水稻幼苗的正向差异表达cDNA文库。共获得1756个克隆,将其中267个阳性克隆送出测序,最终得到204条序列。 利用BLAST在GenBank数据库中对获得的cDNA序列进行相似性比对分析,除去重复序列后,共得到28个上升表达差异基因。这些基因所编码的蛋白质中有18个为功能已知或推测蛋白,这些基因涉及植物体内各种代谢反应,其中有4个基因参与了叶绿体的形成;3个参与了营养物质的转运代谢;其他的参与诸如细胞的周期调控、胞内细胞器运动、信号传导、基因调控、防卫反应等多种植物的生理生化功能。有10个基因在数据库中找到同源性序列,但功能尚不清楚;本研究为揭示激活蛋白的作用机理奠定基础。