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T-2毒素(T-2 toxin,T-2)和玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEN)广泛存在于自然界,主要污染玉米、大米、小麦、和燕麦及以这些谷物为原料的配合饲料等。研究表明T-2毒素和玉米赤霉烯酮是6种常见强毒性真菌毒素之一,可导致人和动物多种毒性损伤,影响人的健康,危害畜禽养殖业的发展,给畜禽养殖带来了巨大损失。本研究合成T-2毒素和玉米赤霉烯酮完全抗原进而制备抗T-2毒素和抗玉米赤霉烯酮2种单克隆抗体,建立了饲料中T-2毒素和玉米赤霉烯酮CLEIA和LFM-ICS检测方法。试验1抗T-2毒素和抗玉米赤霉烯酮的单克隆抗体的制备本研究合成T-2毒素完全抗原T2-HS-JF-BSA和T2-HS-OVA,以T2-HS-JF-BSA为免疫原免疫BALB/c小鼠,应用杂交瘤技术制备抗T-2毒素的单克隆抗体;合成玉米赤霉烯酮完全抗原ZEN-CMO-BSA,复苏实验室保存的玉米赤霉烯酮抗体分泌株细胞并进行亚克隆,以ZEN-CMO-BSA为包被原,采用间接ELISA进行阳性筛选。将阳性细胞株扩大培养后接种BALB/c小鼠制备抗玉米赤霉烯酮的单克隆抗体。鉴定2种制备的真菌毒素单克隆抗体的免疫学性质,结果显示抗T-2毒素和抗玉米赤霉烯酮单克隆抗体的灵敏度(IC50)分别为0.36 ng/mL和2.02 ng/mL,且特异性良好,与其他4种常见真菌毒素无明显交叉反应。试验2饲料中玉米赤霉烯酮CLEIA检测方法的建立为了建立比较间接竞争化学发光酶联免疫分析法(ic-CLEIA)与直接竞争化学发光酶联免疫分析法(dc-CLEIA)检测饲料中玉米赤霉烯酮的方法。采用二因子交叉试验优化确定最佳包被原浓度和抗体稀释度,建立ic-CLEIA和dc-CLEIA。结果显示ic-CLEIA在0.05～5 ng/mL范围内线性关系良好,线性回归方程为y=-0.383 5x+0.4179(R2=0.994 6),灵敏度(IC50)为0.611 ng/mL,检出限(LOD)为15 pg/mL,平均批内和批间变异系数分别为1.79%和1.02%。饲料添加样品回收率为91.9%～112.1%,变异系数小于10.5%;dc-CLEIA在0.025～5 ng/mL范围内线性关系良好,线性回归方程为 y=-0.386 5x+0.334 1(R2=0.991 8),灵敏度(IC50)为 0.372 ng/mL,检出限(LOD)为3 pg/mL,平均批内和批间变异系数分别为1.16%和1.20%。添加样品回收率为87.3%～119.3%,变异系数小于9.8%。结果表明建立的2种检测方法灵敏度高、精确性好,均可作为定量检测玉米赤霉烯酮的有效手段,并且与ic-CLEIA相比,dc-CLEIA更适用于本研究中检测饲料中的玉米赤霉烯酮的后续研究。试验3饲料中T-2毒素的CLEIA检测方法的建立为了建立饲料中T-2毒素间接化学发光酶联免疫检测方法(ic-CLEIA)。以合成的T2-HS-BSA和制备的T-2单克隆抗体为基础,通过二因子交叉试验优化确定包被原T2-HS-BSA最佳包被浓度和单克隆抗体稀释度。结果显示ic-CLEIA最佳检测条件是T2-HS-BSA包被工作浓度为0.15 ug/mL和McAb的最佳稀释度为1:1536 000。建立的T-2毒素ic-CLEIA检测方法在0.025～0.3 ng/mL范围内线性关系良好,线性回归方程为 y=-0.641 1x+0.160 7(R2=0.998 3),灵敏度(IC50)为 0.093 2 ng/mL,检出限(LOD)为11.4 pg/mL,平均批内和批间变异系数分别为2.02%和6.15%。饲料添加样品回收率为96.8%～126.8%,变异系数小于13.5%。结果表明建立的该检测方法灵敏度高和精确性好,可作为T-2毒素定量检测的有效手段。试验4饲料中玉米赤霉烯酮和T-2毒素LFM-ICS检测方法的建立本研究将抗玉米赤霉烯酮和抗T-2毒素单克隆抗体分别与镧系荧光微球进行偶联制备荧光探针,及在NC膜上喷涂完全抗原(ZEN-CMO-BSA或T2-HS-BSA)和羊抗鼠二抗分别作为检测线(T线)和控制线(C线),研制饲料中玉米赤霉烯酮或T-2毒素的镧系荧光微球免疫层析试纸条(LFM-ICS)检测方法。在优化工作条件下,建立的玉米赤霉烯酮检测方法在0.5～80 ng/mL范围的线性回归方程为y=-0.304 2x+0.6196(R2=0.984 0),灵敏度(IC50)为 2.47 ng/mL,检出限 LOD 和 QLOD(定性检测限)分别为0.12 ng/mL和1 ng/mL,平均批内和批间变异系数分别为2.34%和4.29%。建立的T-2毒素检测方法在0.125～2 ng/mL范围的线性回归方程为y=-0.609 7x+0.314 4(R2=0.990 6),灵敏度(IC50)为 0.518ng/mL,检出限 LOD 和 QLOD 分别为0.109 ng/mL和0.25 ng/mL,平均批内和批间变异系数分别为3.27%和4.36%。,结果表明建立的镧系荧光微球免疫层析(LFM-ICS)分析检测技术灵敏度高、重复性和稳定性好,可作为玉米赤霉烯酮和T-2毒素的1种POCT检测(即时检测)方法,具有很好的应用前景。