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目的：建立大鼠肝祖／卵圆细胞增殖模型,分离并鉴定GPC3阳性卵圆细胞亚群,为深入探索GPC3对卵圆细胞癌变作用奠定物质基础。方法：1.选择42只体重约150-180g雄性SD大鼠,按随机原则分为对照组和模型组。采用经典2-乙酰氨基芴结合三分之二肝大部分切除术(2-acetylaminofluorene/partial hepatectomy,2-AAF/PH)方法建立卵圆细胞增殖模型,即按15mg/kg剂量灌胃2-AAF4天,次日行三分之二肝大部分切除术,术后继续以相同剂量2-AAF灌胃1周。2.两组大鼠在10%水合氯醛腹腔麻醉下于术后第0d、4d、7d、9d、11d、13d和16d处死后取出肝脏组织,予10%中性福尔马林固定液固定、常规石蜡包埋并制成5μm组织切片；各组组织切片行苏木精-伊红染色(hematoxylin and eosin stain, HE染色)以观察不同时间点卵圆细胞增殖情况；同时,利用卵圆细胞特异性OV-6抗体进行免疫组织化学染色(Immunohistochemical, IHC),并在400高倍镜下对10个不同视野汇管区进行OV-6阳性细胞计数,用SPSS13.0软件包采用多样本均数比较的单因素方差分析对所有数据进行统计学处理,确定卵圆细胞增殖高峰时间。3.采用两步酶消化法结合Percoll密度梯度离心法于增殖高峰期初步分离卵圆细胞群,并采用免疫组织及免疫细胞化学染色(Immunocytochemical, ICC)的方法鉴定该群细胞的OV-6、CK19和GPC3的表达。4.在此基础上通过间接免疫磁珠分选技术进一步分选GPC3阳性卵圆细胞亚群。结果：2-AAF (15mg/kg)/PH能有效建立SD大鼠卵圆细胞增殖模型,卵圆细胞增生灶多集中于汇管区小叶间胆管处；对照组和术后第0天无OV-6阳性细胞,而其他模型组各时间点均可见OV-6阳性细胞,随着PH时间的延长,OV-6阳性细胞数量逐渐增加,以术后第9-11天达高峰,之后OV-6阳性细胞数逐渐减少。同时,两步酶消化法结合Percoll密度梯度离心有效分离纯化得到离体卵圆细胞群；该群卵圆细胞可表达OV-6、CK19及GPC3三种抗原；在该卵圆细胞群基础上通过间接免疫磁珠分选技术能得到GPC3阳性卵圆细胞。结论：1.2-AAF/PH(15mg/kg的2-AAF结合2/3肝部分切除术)能成功建立SD大鼠肝祖／卵圆细胞增殖模型,术后第9-11天为卵圆细胞增殖高峰期。2.该模型分离的卵圆细胞能同时表达OV-6、CK19和GPC3三种抗原；进一步证实GPC3为卵圆细胞的新型表面标志。3.间接免疫磁珠分选技术可分离纯化GPC3阳性卵圆细胞亚群。