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目的 卵巢恶性肿瘤是女性生殖器官常见的恶性肿瘤，其发病率占女性生殖器官恶性肿瘤的第三位，仅次于子宫颈癌和子宫内膜癌。由于受卵巢解剖位置的影响，卵巢癌早期诊断困难，晚期治疗效果差。尽管卵巢癌细胞减灭术的水平不断提高，新的化疗药物不断被开发利用，卵巢癌总的5年生存率仍然很低，徘徊在25％-30％。为此，建立新的、有效的卵巢癌防治措施势在必行。 非类固醇类抗炎药物(nonsteroid anti-inflammatory drugs NSAIDs)是Felix Hoffman于1893年首先发现的治疗关节炎的药物，很长一段时间，在临床上被用于抗炎镇痛，只是在最近才发现它们能被用来防治结肠癌的发生。研究表明，NSAIDs对肿瘤细胞的增殖具有抑制作用，并能促进肿瘤细胞的凋亡。因此认为NSAIDs在肿瘤的化学预防方面极具发展潜力。Vane在1971年提出NSAIDs的抗炎机制在于抑制了环氧合酶(COX)，它是催化花生四烯酸(AA)转化成前列腺素类物质(PGs)的关键酶，具有两种同分异构体的形式，即COX-1和COX-2，它们分别由位于两条不同染色体上的各自独立的基因所编码。根据NSAIDs对COX异构体COX-1和COX-2抑制作用的不同，可将其分为三类：COX-1选择性抑制剂，COX-2选择性抑制剂，COX非选择性抑制剂。本研究采用的NS398{N-[2-(cyclohexyloxy)-4-nitrophenyl]-methane sulfonamide}是一种磺胺类药剂的衍生物，属于NSAIDs中的COX-2选择性抑制剂，特异性地抑制COX-2。 近年来的研究显示，COX-2在许多种人类肿瘤，如结肠癌、胰腺癌、肺癌、前列腺癌、胃癌等恶性肿瘤中表达上调，而COX-1表达保持不变，我们也首次在卵巢上皮性浆液性癌中检测到COX－2的表达，其表达率高达 81．9％。为探讨 NS398是否具有抗人卵巢癌细胞的活性，我们采用体外实验的方法，观察NS398对人卵巢癌细胞系的影响，为NS398防治卵巢癌提供实验依据。 材料与方法 材料：人卵巢上皮性浆液性癌细胞系CAOV3，OVCAR3由中国医科大学细胞生物实验室提供。两种细胞分别贴壁生长在含10助热灭活胎牛血清（Fetal Bovine Serum FBS），青霉素 100U／Inl，链霉素 100pg／all的 RPMll640培养基中，于 37tj％CO卜饱和湿度的恒温密闭培养箱内传代培养，0．25％胰蛋白酶（TyPsin）消化。 试剂：NS398为美国 Cayman公司产品；COX－2单抗／P免疫组织化学试剂盒为美国 Santa Cruz公司产品；COX－ZmRNA及内对照引物由北京奥科生物有限责任公司合成；逆转录试剂盒由大连宝生物公司（TaKaR公司产品）提供；四甲基偶氮哩蓝（MTf人苔盼蓝为美国Sipoa公司产品；末端脱氧核着转移酶门dT）凋亡原位染色试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司；RT－PCR。DNA叫adder常规试剂由中国医科大学第二临床学院卫生部先天畸形实验室提供。 方法： 1．免疫组化实验 2．RT—PCR实验 3．细胞生长抑制实验 3．1 细胞计数法 3．2 MrIT法 4．细胞形态学实验 ·2· 4．1 倒置相差显微镜（Inverted Phase Con恤st Microscope） 4．2 电镜（Elec肋n microscope） 5．DNA梯形电泳： 6．末端脱氧核着转移酶介导的dUTP缺口末端标记实验（Termind deo xyxynucleotldgl ransferase－mediated dUTP nick end labelingTUNEL） 统计学分析：应用 SPSS for windows100软件包分析数据。NS398对人卵巢癌细胞系的作用结果以 X i S表示，显著性检验采用单因素方差分析Dunnett t检验。 结 果 1．人卵巢癌细胞系 CAOV3和 OVCAR3的 COX－2蛋白及COX－ZmRNA表达均为阳性。 2．细胞计数法及MTh法实验结果均显示，NS398组活细胞数明显少于未加药组门照组厂并随药物浓度的增加活细胞数逐渐减少，抑制率增加。同时，每个药物浓度组随药物作用时间的延长，活细胞数进一步减少，抑制率进一步增加。本研究中以药物作用72小时，其剩余的活细胞数与对照组相比明显减少，具有统计学意义瞩＜0．05厂提示随着药物浓度的增加，以及作用时间的延长，细胞增殖的抑制越发显著。 3．细胞形态学结果显示，相差显微镜下，细胞密度明显降低，细胞体积缩小，细胞间隙明显增宽，细胞内可见明显的“空泡”状结构；扫描电镜下，细胞体积明显缩小，间隙明显增宽，其表面的微绒毛骤然减少以至消失；透射电镜下，细胞核膜完整，染色质聚集成块，边集，胞浆内可见完整的细胞器，细胞膜完整，可见“膜发泡”及“凋亡J体”口 4．DNA梯形电泳显示，NS398（100pM）作用72＊时的CA－ ·3·OV3细胞和 OVCAR3细胞出现特征性的梯形谱带。 5．TUNEL实验显示，经NS398（100pM）处理72J时的CA－OV3细胞，大部分细胞的细胞核内出现棕褐色颗粒，提示为凋亡细胞。 讨 论 流行病学、临床、动物及实验室的研究均证明NSAIDS具有预防结直