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前言
沙门菌是一类危害人和动物健康的重要致病菌,广泛存在于自然界,至今已经发现的血清型有2579种。不同血清型致病力明显不同,其中伤寒和副伤寒沙门菌可引起严重症状,如伤寒和副伤寒等肠热症,甚至可引起败血症导致死亡。而非伤寒沙门菌引起的许多公共卫生事件被各种传媒广泛报道而影响到全球范围的相关食品贸易。肠炎沙门菌是非伤寒沙门菌中常见的血清型之一,是造成感染性腹泻病例的优势菌型。
目前,人群中喹诺酮类和头孢菌素耐药的沙门菌,尤其是多重耐药的沙门菌在世界各地陆续被报道,这类细菌常出现氟喹诺酮类和头孢菌素药物耐药性上升,容易导致临床治疗时间延长,复发感染,发病率和死亡率增高。监测肠炎沙门菌的耐药性,对人类感染肠炎沙门菌的预防和控制具有重大意义。
DNA大限制性片段分析是用限制性内切酶酶切基因组DNA,产生少量限制性片段(通常是10~20个),并根据片段的不同对DNA大分子进行鉴定。脉冲场凝胶电泳(pulsed-field gel electrophoresis,PFGE),通过在凝胶上外加正交变脉冲电场,使35~10,000kb的DNA分子在凝胶中也能得到有效分离。该方法可以快速将来自病人或食品样本中细菌的PFGE结果进行比较,根据来自同一亲代的个体具有共同的遗传物质,可在PFGE试验中表现出相同的指纹图谱这一原理,确定致病菌的亲缘关系,追溯共同的致病食品源头。
实验方法
1.鉴定沙门菌属血清分型
采用自动化分析仪VITEK2Compact鉴定沙门菌属,血清凝集法确定肠炎沙门菌血清型。针对沙门菌鞭毛抗原脆弱易缺失等特点,采用位相诱导法进行鞭毛抗原凝集,确定具体血清型。
2.肠炎沙门菌的耐药性
琼脂稀释法测定氨苄西林、萘啶酸、氯霉素、复方新诺明、头孢噻肟和头孢他啶的最小抑菌浓度(MIC),分析耐药特点。
3.肠炎沙门菌的同源性
PFGE对肠炎沙门菌进行分子分型检测,进行同源性分析。分别取肠炎沙门菌单克隆菌株用低熔点胶灌模,蛋白酶K50℃消化2h,60UXbaI、30UBlnI和30USpeI消化细菌染色体DNA4h,1.0%的脉冲场凝胶电泳仪专用胶,电泳仪为美国Bio-Rad公司生产的CHEF-MapperXA,0.5×TBE缓冲液,温度14℃,电压为6V/cm,角度120°,脉冲时间分别为2.16~63.Ss、2.16~63.8s、1~20s,电泳时间分别为18h、18h、20h。
结果
1.肠炎沙门菌血清型
2009年1月~2011年9月,我院临床分离的59株沙门菌,共区分出7种不同血清型,31株肠炎沙门菌(52.54%),血清型为为(1,9,12:g,m:-);10株鼠伤寒沙门菌(16.95%),血清型为(1,4,[5],12:i:1,2);10株猪霍乱沙门菌(16.95%),血清型为(6,7:c:1,5);2株婴儿沙门菌(3.39%),血清型为(6,7,14:r:1,5);1株蒙得维的亚沙门菌(1.69%),血清型为(6,7,14:g,m,[p],s:[1,2,7]);1株拉古什沙门菌(1.69%),血清型为(1,4,[5],12:i:1,5);1株埃森沙门菌(1.69%),血清型为(4,12:g,m:-);未鉴定出血清型3株(5.08%)。
2.肠炎沙门菌耐药特点
31株肠炎沙门菌对萘啶酸耐药率最高为96.77%,其次耐药率较高的是氨苄西林(45.16%),对复方新诺明和头孢噻肟的耐药率分别为9.68%和6.45%,对氯霉素的耐药或中介为6.45%,全部肠炎沙门菌均对头孢他啶均不耐药。4株(12.90%)肠炎沙门菌同时对3种抗菌药物耐药,1株(3.23%)同时对4种抗菌药物耐药。
3.肠炎沙门菌的同源性分析
31株XbaI酶切共区分5种不同带型,各带型条带数相差小于等于3条,可视为同一带型。BlnI酶切共区分6种不同带型,各带型条带数相差1~4条,非同一带型,但相似系数在0.800~0.960之间,相似性很高。SpeI酶切共区分4种不同带型,各带型条带数相差1~6条,非同一带型,但相似系数在0.850~0.974之间,相似性很高。
结论
1.沙门菌的血清型表现为多样性,肠炎沙门菌是我院感染性腹泻的主要血清型。
2.肠炎沙门菌对萘啶酸耐药率极高,而我院也出现多株多重耐药的肠炎沙门菌。
3.三种限制性内切酶结合,共区分11种不同带型,更有效的区分PFGE型别,提高了方法的分辨率。