论文部分内容阅读
新霉素(neomycin, NEO)是一种氨基糖苷类抗生素(aminoglycosides),因其具有高效、广谱的抗菌作用,广泛应用于医药和兽药领域。新霉素虽然是重要的抗感染类药物,但因其对人和动物存在潜在的肾毒性和耳毒性等毒副作用,危害人体健康,使动物源性食品安全受到威胁,而被多个国家禁止和限制使用。所以建立新霉素残留的快速检测方法十分必要。国内外对新霉素残留的检测方法主要有理化方法、微生物法和免疫学分析方法。酶联免疫吸附测定方法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)因其具有快速、简便、灵敏、特异等优点,在兽药残留检测的领域得到了较为广泛的应用,发展迅速。本研究旨在制备出具有良好免疫原性的新霉素人工抗原,对其进行鉴定及免疫效果评价。由于新霉素为小分子半抗原,不具备免疫原性,应用蛋白质连接技术,将新霉素与牛血清白蛋白(bovine serum aibumin, BSA)、卵清蛋白(ovaibumin, OVA)进行偶联,制备出新霉素人工抗原NEO-BSA及NEO-OVA,用紫外光谱分析法测定其蛋白质浓度,用红外光谱分析法(IR)、SDS-PAGE电泳法对其质量进行初步鉴定；用NEO-BSA免疫BALB/c小鼠,间接ELISA法测定多抗上清(pAb)抗体效价,阻断ELISA法鉴定pAb敏感性,交叉反应试验鉴定pAb特异性,综合评价新霉素人工抗原的免疫效果。实验数据表明：测定偶联产物NEO-BSA、 NEO-OVA的蛋白浓度分别为6.344、4.122mg/ml; NEO-BSA的红外光谱结果与BSA相比,发生了相对明显的改变,NEO-BSA的电泳条带与BSA的相比,NEO-BSA相对滞后,并出现了明显的拖尾现象,表明新霉素人工抗原制备成功。用NEO-BSA免疫小鼠,获得的pAb效价为1：3200,半数抑制浓度为105μg/ml,该pAb只与新霉素有强特异性反应,与链霉素、卡那霉素、庆大霉素的交叉反应率均小于0.5%,与沙丁胺醇、土霉素交叉反应率均小于0.1%。本研究制备出了具有良好免疫原性的新霉素人工抗原,为进一步制备高亲和力抗新霉素单克隆抗体,建立新霉素残留的免疫学检测方法,研制新霉素快速诊断试剂奠定了基础。