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哺乳动物的脂肪沉积主要由脂肪细胞的增殖、分化及肥大所决定。而脂肪细胞的形成,由间充质干细胞增殖、定向及终末分化而来。在这些过程中涉及众多脂肪细胞调节转录因子的级联调控,以及多个信号通路和microRNAs(miRNAs)的调节。本实验室前期用高通量测序技术在不同脂尾型绵羊品种(系)间筛选出了一批对于脂质代谢存在潜在调控作用的miRNAs。本研究挑选其中一个差异表达显著的miRNA:miR-299a-3p,旨在研究其与靶基因在绵羊脂肪代谢中的调节关系。本研究使用绵羊前体脂肪细胞为体外研究模型。利用多种软件预测miR-299a-3p的潜在调控靶基因并进行KEGG通路分析。利用荧光定量PCR技术检测miR-299a-3p在不同脂尾型绵羊尾脂中的差异表达,及miR-299a-3p和潜在靶基因在脂肪细胞分化过程中的时序表达。通过构建miR-299a-3p的过表达载体,并对其进行细胞转染,利用双荧光素酶报告系统检测miR-299a-3p与其靶基因结合位点的真实性;利用荧光定量PCR和Western-blotting技术,检测miR-299a-3p对其靶基因在mRNA和蛋白水平上表达的影响。主要获得的研究结果如下:(1)通过 miRanda,TargetScan 和 DIANA-microT 在线软件,正向预测获得了 UCP2为miR-299a-3p的候选靶基因之一,反向预测发现有2个miRNAs与UCP2的3,-UTR结合,miR-299a-3p为其中之一,表明miR-299a-3p与UCP2是理论最合适的靶标关系,同时这种结合在多个物种中高度保守。(2)对绵羊前体脂肪细胞进行分化处理,发现miR-299a-3p与其潜在靶基因UCP2在分化早期时序表达呈显著负相关(f<0.01)。表明miR-299a-3p对UCP2具有负调控作用。(3)双荧光素酶报告系统显示,miR-299a-3p在UCP2的3’-UTR区结合位点真实。荧光定量PCR和Western-blotting结果显示,miR-299a-3p可以显著地(P<0.05)抑制UCP2 mRNA和蛋白质的表达。(4)通过油红O染色,以及脂肪细胞分化标志基因PPARy mRNA和AP2 mRNA表达量的检测,发现miR-299a-3p对绵羊前体脂肪细胞的分化有促进作用。综上所述,UCP2是miR-299a-3p直接作用靶基因,miR-299a-3p通过下调UCP2 mRNA表达,调节绵羊前体脂肪细胞的分化。以上结果为进一步研究miR-299a-3p对绵羊脂肪细胞分化的调节机制奠定基站。