越橘花青素对人巩膜成纤维细胞表达MMP-2、Collagen I蛋白的影响

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目的:  探讨越橘花青素对人胚胎巩膜成纤维细胞(Human fetal scleral fibroblast。HFSF)表达MMP-2、Collagen I蛋白的影响。  方法:  对HFSF细胞进行复苏培养,在倒置相差显微镜下观察其细胞生物学特性;分别用0、10-6、10-5、10-4、10-3、10-2、10-1、1mg/mL越橘花青素作用于HFSF细胞达6h、8h、12h、24h、48h,MTT法检测越橘花青素对HFSF细胞增殖的影响;用浓度为0,10-1mg/mL的越橘花青素作用于HFSF细胞达12h,流式细胞仪检测越橘花青素对HFSF细胞周期和细胞凋亡的影响;实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测越橘花青素对HFSF细胞表达MMP2、COL1A1、COL1A2基因的影响;免疫印迹法(Western Blot)检测越橘花青素对HFSF细胞表达基质金属蛋白酶2(Matrix metalloproteinase2。MMP-2)、I型胶原蛋白(Collagen I)的影响;免疫印迹法(Western Blot)检测TGF-β2对HFSF细胞表达I型胶原蛋白(Collagen I)的影响。  结果:  体外培养的成熟人胚胎巩膜成纤维细胞多呈梭形,束状或旋涡状排列;MTT结果显示越橘花青素促进HFSF细胞生长,在浓度10-1mg/mL、培养12h时细胞的增殖率最高;流式细胞术的结果显示越橘花青素的作用增加了G2期的HFSF细胞,且对HFSF细胞凋亡没有影响;qRT-PCR检测的结果显示越橘花青素作用HFSF细胞后,下调其MMP2基因的表达量,而细胞COL1A1、COL1A2基因表达量的改变没有统计学意义;Western Blot检测的结果显示越橘花青素作用HFSF细胞后,下调其MMP-2蛋白的表达,而细胞Collagen I蛋白的表达未检测出;使用TGF-β2作用HFSF细胞后,Western Blot法能够检测到细胞Collagen I蛋白的表达。  结论:  越橘花青素促进体外培养HFSF细胞的生长,并具有抑制MMP-2蛋白表达的作用。TGF-β2能够诱导HFSF细胞表达Collagen I蛋白。
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