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抗菌肽是指氨基酸数目小于100，带正电荷，并具有广谱抗性及热稳定性的一类小肽。鉴于抗菌肽良好的抗菌活性，目前抗菌肽主要应用于抗菌和防腐，近年来抗菌肽被发现具有免疫佐剂的潜力，并且已经得到证实。本文以人工合成的抗菌肽MetalnikowinII（Met）作为免疫佐剂，研究其对禽多杀性巴氏杆菌ptfa蛋白的免疫佐剂效果。本文通过PCR法扩增ptfa基因片段，用限制性内切酶BamHⅠ、HindIII分别对pET32a质粒及ptfa基因片段进行双酶切，用T4DNA连接酶连接ptfa基因片段与pET32a获得重组质粒pET32a-ptfa， CacL2法转入BL21感受态细胞中，IPTG诱导表达，表达蛋白经SDS-PAGE电泳进行鉴定，采用镍柱纯化，纯化后的ptfa蛋白浓度为140mg/L，冰箱放置备用。1日龄非免疫雏鸡随机分为6组，分别为蜂胶佐剂+ptfa蛋白、Met0.2mg++ptfa蛋白+弗氏佐剂组（以下简称Met0.2）、Met0.4mg+ptfa蛋白+弗氏佐剂组、Met0.6mg+ptfa蛋白+弗氏佐剂组、ptfa蛋白+弗氏佐剂组及生理盐水对照组。21日龄时首免，试验组注射相应乳化疫苗（0.4ml/只），对照组肌肉注射等量生理盐水，42日龄时二免，于一免后7d、14d、21d、28d、35d、42d进行翼下静脉采血，静脉血室温放置，分离血清，-20℃放置备用，并用二免后7d、14d、21d采集外周血进行MTT试验。通过ELISA试验检测静脉血清中特异性抗体效价，MTT试验检测鸡体内淋巴细胞转化率，分析ELISA及MTT试验结果进而评定Met对ptfa蛋白在鸡体内免疫效果的影响。本试验成功表达ptfa蛋白并进行纯化，免疫试验结果表明各实验组在二免第二周抗体水平达到最高，各组抗体水平相对于同时期的对照组都较高，且差异显著（P<0.05），在一免后的三周内，各组抗体水平呈上升趋势，Met0.4组抗体水平最高，Met0.6组次之，一免之后第三周蜂胶佐剂组与生理盐水组差异不显著（P>0.05）。在二免之后Met0.2、弗氏佐剂组之间抗体水平接近，Met0.4与Met0.6组抗体水平明显高于其他三组，Met0.4组血清抗体效价在二免后第二周达到最大值，其抗体效价为1：51200，表明Met作为佐剂对鸡的体液免疫起到一定的效果，0.4mg为最佳佐剂剂量。MTT试验结果表明在二免第二周各实验组均达到最大值，且与生理盐水对照组相比都有显著提高，Met0.4、Met0.6组与弗氏佐剂组差异极显著（P<0.01），Met0.2组与弗氏佐剂组之间差异显著（P<0.05），Met0.4组与Met0.6组之间差异显著（P<0.05），因此结果表明Met0.4可以更有效的促进淋巴细胞转化，抗菌肽Met可以有效的促进淋巴细胞转化，综合判断Met可以在一定程度上促进雏鸡的细胞免疫应答。本试验以ptfa蛋白为抗原，抗菌肽Met作为佐剂证明抗菌肽Met具有良好的免疫佐剂效果，为现代新型免疫佐剂的研究奠定了基础。