【摘 要】
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大豆是需磷较多的作物，但土壤磷多以植物不能直接吸收利用的有机态存在，有效态磷严重缺乏。本研究在分析大豆转化影响因素基础上，采用农杆菌介导与花粉管通道转化技术将酸性磷酸
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大豆是需磷较多的作物，但土壤磷多以植物不能直接吸收利用的有机态存在，有效态磷严重缺乏。本研究在分析大豆转化影响因素基础上，采用农杆菌介导与花粉管通道转化技术将酸性磷酸酶GmPAP4和耐低磷转录因子AtPHR1转化不同大豆品种，创制耐低磷转基因新种质，并对转基因材料进行耐低磷特性评价。研究结果为大豆遗传转化提供技术支撑，为耐低磷新品种培育奠定物质基础。主要结果如下:
1.优化了大豆农杆菌介导遗传转化体系。以萌发5d大豆幼苗制备子叶节外植体，预培养1d，农杆菌菌株为EHA105，菌液OD600为0.7，侵染液OD600为0.5或0.7进行转化，100 mg/L卡那霉素筛选的抗性芽诱导率最高;转化率最高的品种是五星2号，其转化率为2％。
2.利用农杆菌介导转化技术将酸性磷酸酶GmPAP4、转录因子AtPHR1转入大豆，获得了11份转基因新种质。其中，JD12-GmPAP4T5代47株，T4代19株，蒙9793-1-GmPAP4 T1代23株，LGD1-GmPAP4 T1代6株，WX2-GmPAP4T1代3株，SD4-GmPAP4 T2代5株;JD17-AtPHR1 T3代1株，WX2-AtPHR1 T2代14株，JD12-AtPHR1T1代7株，LGD1-AtPHR1 T1代6株，JD7-AtPHR1 T1代4株;通过混合菌株共转化技术将GmPAP4与AtPHR1转入同一品种，获得3株转有2个目的基因的T1植株。
3.采用花粉管通道转化技术将GmPAP4、AtPHR1转入不同品种。中黄41、绥农14与中黄15的转化后结荚率较高;获得了转GmPAP4的T2代SN14-GmPAP429株（9个株系），ZH15-GmPAP411株（1个株系），JD17-GmPAP44株（2个株系）;获得了转GmPAP4无载体、无标记线性片段T0代JD12-GmPAP4阳性植株17株;转有无标记载体PX6-AtPHR1的ZH41-AtPHR1的T2材料6株（3个株系）。
4.分析了转GmPAP4大豆新材料耐低磷特性。转基因植株在植酸磷处理条件下根系和地上部的生长势明显优于野生型对照;三个转基因株系的根系分泌酸性磷酸酶活性分别比对照提高4％、11％、22％，且其中两个株系的酶活性与对照差异达显著或极显著水平。
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