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目的：
建立检测 TAP1、TAP2、LMP2、LMP7基因mRNA的实时荧光定量方法，并运用所建立的方法检测肿瘤组织及正常粘膜组织细胞内TAP1、TAP2、LMP2、LMP7基因mRNA含量，同时检测细胞表面HLA-Ⅰ抗原的表达水平，探讨结直肠癌肿瘤组织细胞HLA-Ⅰ类分子下调的表达机制。
方法
1.应用美国应用生物系统公司生产的ABI7500实时荧光定量PCR仪，以组织细胞β-actin为内参照，正常粘膜组织为对照，建立测定结直肠癌癌组织细胞内TAP1、TAP2、LMP2、LMP7基因mRNA相对含量的检测方法。
2.应用S-P法免疫组化技术检测结直肠癌组织和正常粘膜组织细胞表面HLA-Ⅰ类分子的表达，分析癌组织细胞表面HLA-Ⅰ类分子的表达与结直肠癌Dukes分期、分化程度的关系。
3.应用所建立的RT-PCR．两步法，测定74例结直肠癌患者癌组织细胞内TAP1、TAP2、LMP2和LMP7基因mRNA的相对含量，并分析TAP1、TAP2、LMP2和LMP7基因mRNA含量与结直肠癌患者癌组织和正常粘膜组织HLA-Ⅰ的表达关系。实验数据采用SPSS13.0软件进行统计分析。
结果
1.74例大肠癌患者正常粘膜组织HLA-Ⅰ类分子表达均为阳性，而癌组织中HLA-Ⅰ阳性者仅有29例，阳性率为39.2％(29/74)。二者比较差异有统计学意义(P<0.001)。
2.肿瘤组织细胞HLA-Ⅰ类分子阳性患者组，癌组织与正常粘膜组织细胞内TAP1、TAP2、LMP2和LMP7基因mRNA含量无显著差异(P值分别为0.05、0.68、0.89、0.06)。
3.肿瘤组织HLA-Ⅰ类分子阴性患者组，癌组织与正常粘膜组织TAP1、TAP2、LMP2和LMP7基因mRNA含量差异显著(P值分别为0.0010、0.0010、 0.0010、 0.0010) 。
4.随大肠癌组织分化程度降低，TAP1、TAP2、LMP2和LMP7基因mRNA表达下降。其中低分化组TAP1、LMP2基因mRNA表达与高分化组和中分化组均有差异(P<0.05)，而TAP2和LMP7基因mRNA含量在不同分化组间仅有下降趋势，无统计学差异(P>0.05)。
5.随大肠癌Dukes分期进展，TAP1、TAP2、LMP2和LMP7基因mRNA表达仅有下降趋势，无统计学差异(P>0.05)。
6.大肠癌患者组织中HLA-Ⅰ类分子表达水平与TAP1、TAP2、LMP2和LMP7基因mRNA含量呈正相关(r分别为0.8576、0.8258、0.8223、0.7818)。
结论
1.应用Primer 5.0软件设计特异性引物，并优化反应体系，以β-actin做内参照和SYBR Green Ⅰ作为荧光染料，成功建立了RT-PCR两步法检测TAP1、TAP2、LMP2和LMP7基因mRNA。
2.结直肠癌组织HLA-Ⅰ类分子阴性表达患者，肿瘤组织细胞内TAP1、TAP2、LMP2和LMP7基因mRNA含量明显下降。且随肿瘤组织分化程度降低而下降。
3.HLA-Ⅰ类分子表达与TAP1、TAP2、LMP2和LMP7基因mRNA含量呈正相关，这表明TAP1、TAP2、LMP2和LMP7表达降低可能是导致结直肠癌细胞HLA-Ⅰ类分子表达降低的重要原因。