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第一章人结肠癌细胞中PCDH8表达及启动子区域甲基化目的：结直肠癌是全球范围内发病率高和死亡率高的恶性肿瘤之一,在我国,结直肠癌居恶性肿瘤发病率的第3位,死亡率的第4位。DNA甲基化是结直肠癌研究的热点,DNA异常甲基化被认为是抑癌基因失活的一个重要原因,因此,其在结直肠癌的发生、发展及转移中起着关键的作用。在膀胱癌、胃癌、乳腺癌、鼻咽癌等恶性肿瘤的研究中,PCDH8基因被认为是一种可能的候补抑癌基因,但是在结直肠癌中尚无报道。该章研究的主要目的是比较人正常结肠上皮细胞株和人结肠癌细胞株中PCDH8mRNA、PCDH8蛋白水平及其启动子区域甲基化差异。方法：1、用RT-PCR检测人结肠正常上皮细胞株(NCM460)和人结肠癌细胞株(HT29、HCT116、SW480、SW620)中PCDH8mRNA的表达；2、用Werstem Blotting方法检测人结肠正常上皮细胞株(NCM460)和人结肠癌细胞株(HT29、HCT116、SW480、SW620)中PCDH8蛋白的表达；3、用甲基化特异性PCR (MSP)检测人结肠正常上皮细胞株(NCM460)和人结肠癌细胞株(HT2、HCT116、 SW480、SW620)中PCDH8基因启动子区域的甲基化。结果：1、PCDH8mRNA在人正常结肠细胞株NCM460中稳定表达,在人结肠癌细胞株HT29和HCT116中表达缺失,在人结肠癌细胞株SW480和SW620中表达下调；2、人正常结肠细胞株NCM460中PCDH8蛋白稳定表达,人结肠癌细胞株HT29、HCT116、SW480和SW620中,PCDH8蛋白表达下调；3、人正常结肠细胞株NCM460中,PCDH8基因启动子区域甲基化阴性；人结肠癌细胞株SW620、SW480、HCT116和HT29中,PCDH8基因启动子区域甲基化阳性。结论：PCDH8基因在人结肠癌细胞株SW620、SW480、HCT116和]HT29中表达下调,可能与PCDH8基因启动子区域甲基化有关,提示为结直肠癌发生发展的因素之一。第二章人结直肠癌组织中PCDH8蛋白表达水平及其启动子区域甲基化目的：探讨人结直肠癌组织、远离结直肠癌的正常组织和人结直肠腺瘤组织中PCDH8蛋白表达水平及启动子区域甲基化方法：1、用免疫组织化学染色检测结直肠癌组织、远离结直肠癌的正常组织和结直肠腺瘤组织中PCDH8蛋白表达水平；2、用甲基化特异性PCR (MSP)检测结直肠癌组织、远离结直肠癌的正常组织和结直肠腺瘤组织中PCDH8基因启动子区域的甲基化变化；3、应用SPSS13.0软件,采用卡方检验统计学方法,分析PCDH8蛋白表达水平与结直肠癌患者临床病理参数的相关性；4、应用SPSS13.0软件,采用卡方检验统计学方法,分析PCDH8基因启动子区域的甲基化变化与结直肠癌患者临床病理参数的相关性。结果：1、结直肠癌组织中,16/68(30.77%)PCDH8蛋白阳性；远离结直肠癌的正常组织中,32/34(94.12%)PCDH8蛋白阳性；结直肠腺瘤组织中,16/20(80%)PCDH8蛋白阳性。远离结直肠癌的正常组织和结直肠腺瘤组织中PCDH8蛋白阳性率均高于结直肠癌组织(P<0.01),远离结直肠癌正常组织和结直肠腺瘤组织中PCDH8蛋白阳性率无显著差异(P=0.321)。2、结直肠癌组织中,56/68(82.35%)发生了PCDH8基因启动子区域的甲基化；远离结直肠癌的正常组织中,仅2/34(5.88%)发生PCDH8基因启动子区域的甲基化；结直肠腺瘤组织中,14/20(70%)发生PCDH8基因启动子区域的甲基化。结直肠癌和结直肠腺瘤组织中PCDH8基因启动子区域甲基化阳性率均高于远离结直肠癌的正常组织(P<0.01),结直肠癌组织和结直肠腺瘤组织中PCDH8基因启动子区域甲基化阳性率无显著差异(P=0.402)。3、PCDH8蛋白的表达水平与结直肠癌患者的性别、诊断时的年龄、肿瘤大小、TNM分期、分化程度、淋巴结转移无明显相关(P>0.05)。4、PCDH8基因启动子区域甲基化与结直肠癌肿瘤大小有明显的相关性(P<0.01),但与患者的性别、诊断时的年龄、TNM分期、分化程度、淋巴结转移无明显相关(P>0.05)。结论：PCDH8基因启动子区域甲基化在人结直肠癌组织和人结直肠腺瘤组织中频繁发生,可能是结直肠癌发生的早期事件,是结直肠癌发生发展的原因之一。