【摘 要】
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该研究主要从以下几个方面进行:1.SCF基因克隆及测序:根据小鼠SCF cDNA膜外段序列设计合成了一对特异引物,应用PCR技术,从pRC/CMV(含小鼠 SCF cDNA)质粒上钓取SCF cDNA,进行T
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该研究主要从以下几个方面进行:1.SCF基因克隆及测序:根据小鼠SCF cDNA膜外段序列设计合成了一对特异引物,应用PCR技术,从pRC/CMV(含小鼠 SCF cDNA)质粒上钓取SCF cDNA,进行TA克隆,通过测序确证克隆基因的正确性,为重组DNA表达体系的建立和基因的表达研究打下基础;2.SCF基因在大肠杆菌中诱导的表达:构建原核表达载体pBV220-SCF、pQE30-SCF,在大肠杆菌中诱导表达,并分析其表达量.初提表达产物,协同刺激骨髓细胞集落的形成;3.SCF基因在COS-7和CHO细胞中的表达:首先构建真核表达载体pcDNA3-SCF.为证明克隆的SCF cDNA能在哺乳动物细胞中表达SCF产物,该文首先进行了SCF cDNA在COS-7细胞中扔瞬时表达,验证基因表达的正确性;以Lpofactin介导转染CHO细胞,经多轮筛选获得稳定转染细胞株;4.SCF基因在骨儿脐血细胞中的表达:通过体外液体培养和半固体培养观察骨髓细胞和脐血细胞中的表达:将SCF基因转染骨髓细胞和脐血细胞,研究其表达情况;5.观察SCF基因在细胞系中的表达情况:将SCF基因转染K562细胞和U937细胞,检测其表达情况,同时测定其对转染细胞增殖周期的影响.
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