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【目的】研究异氟烷对神经干细胞（NSCs）增殖与分化的毒性作用，探讨Calpain及其下游相关信号通路在异氟烷对NSCs影响中的作用，为预防和治疗全身麻醉药对发育期大脑神经毒性作用提供一定理论依据。 【方法】 1.原代提取和培养SD大鼠新生鼠（出生1 d内）海马NSCs，取传代至第2代细胞进行后续试验。 2. NSCs诱导分化培养，取传代NSCs置于诱导分化培养基内培养，7～9d分化完成。 3.实验分组及药物处理，实验随机分为4组（n=5），包括空白对照组（CON control）：给予含有21％O2和5%CO2的混合气体，处理6h；异氟烷组（ISO）：给予3.4％异氟烷，处理6h；calpeptin组(CP)：于麻醉前30分钟于培养基中加入10μM calpeptin，并给予含有21％O2和5%CO2的混合气体，处理6h；异氟烷+calpeptin组(ISO+CP)：于麻醉前30分钟于培养基中加入10μM calpeptin，给予3.4%异氟烷，处理6h。 4.乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒检测NSCs乳酸释放量。 5. TUNEL试剂盒检测NSCs凋亡。 6. BrdU检测NSCs增殖。 7. Western blot检测GFAP、Tuj-1、αII-spectrin及其裂解产物SBDP145、CDK5、p35、p25蛋白水平变化。 【结果】 1. NSCs呈悬浮生长，约3d左右形成神经球，传代后行免疫荧光化学染色检测NSCs标志物nestin，第二代NSCs阳性率为（94.24±3.99）%。 2.与CON组相比，ISO组LDH释放量在麻醉后0h、12h、24h都增高，差异有统计学意义；而ISO组在麻醉后各时间点的TUNEL阳性细胞数目并不显著增多。 3.与CON组相比较，ISO组在麻醉后0h、12h、24h时BrdU标记的NSCs的数目明显减少。 4.与CON组相比较，ISO组在麻醉后0h和12h，SBDP145水平明显升高（P<0.01)，24h时无明显改变。 5.与CON组相比较，CP组SBPD145水平降低，与ISO组相比，ISO+CP组SBPD145水平明显下降。 6.与CON组相比，ISO组BrdU阳性细胞数目显著减少，而CP组无明显差异；与ISO组相比，ISO+CP组BrdU阳性细胞数目增加。 7.与CON组相比，ISO组GFAP水平升高，Tuj-1水平无明显改变；CP组GFAP水平无明显改变，而Tuj-1水平升高。与ISO组相比较，ISO+CP组GFAP水平降低，Tuj-1水平无明显改变。 8.与CON组相比，ISO组在麻醉后0h、12h、24h CDK5和p25表达水平增高，而p35水平下降，其差异均有统计学意义。与CON组相比，CP组p35表达水平增高，而p25、CDK5表达水平无明显变化；与ISO组相比，ISO+CP组p35表达水平增高而p25、CDK5表达水平降低。 【结论】异氟烷可导致NSCs活性减弱，但不引起NSCs凋亡。异氟烷可通过Calpain及下游靶点相关信号通路抑制NSCs的自我更新并促进NSCs分化为胶质细胞。抑制Calpain信号通路可能是防御异氟烷致发育期NSCs毒性的重要手段。