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构树是属于桑科构属雌雄异株的落叶乔木,杂交构树为中科院植物所自主培育的构树新品种,杂交构树生长迅速、根系发达,抗逆性强,具有重要的荒坡、盐碱地绿化的利用潜能;其叶片粗蛋白含量高,是一种优良的高蛋白非常规饲料;其韧皮纤维发达,质量优良,适于生产高档纸产品。杂交构树作为一种优良的多用途经济树种,为更好地发挥其经济价值,扩大其种植面积,需要解析杂交构树形成逆境抗性的分子机制,进一步提高其抗逆能力。WOX转录因子家族基因在控制植物形态建成过程中发挥重要的调控作用。本研究以WOX转录因子家族基因为出发点,研究杂交构树在面临各种环境胁迫时,该家族基因的表达水平变化。 主要结果如下: 1.基因克隆:首先通过参照构树近缘物种的WOX基因序列,设计简并引物,扩增得到目标基因的部分片段序列;然后采用RACE扩增获得全长cDNA序列。本实验共克隆得到10个杂交构树的BpWOX基因。 2.系统进化分析:通过将杂交构树与其它在植物起源和进化过程中具有代表性的物种的WOX蛋白全长氨基酸序列进行比对,构建系统进化树。系统进化分析表明,所克隆到的10个BpWOX基因在三个进化中均有分布,其中属于WUS支的包含6个。 3.组织特异性分析:为了研究杂交构树BpWOX基因的活性表达部位,采用半定量和实时定量PCR两种实验方法分别检测了该家族基因在10种不同组织器官中的表达情况。结果表明,BpWOX8/9/10这三个基因在所有的组织中都有较高表达,BpWOX7在所有组织中的表达量都较低,其它基因都只在部分组织中特异表达。 4.环境胁迫下的表达模式分析:为了分析杂交构树BpWOX基因的胁迫响应模式,本实验通过实时荧光定量的方法检测6个BpWOX基因分别在10种不同胁迫处理下的表达模式。结果表明,不同BpWOX基因能够受到不同环境胁迫的影响。 综上所述,本研究共克隆到10个杂交构树BpWOX基因,对它们的系统进化关系进行了分析,并分析了它们表达的组织特异性以及它们在各种环境胁迫下的表达模式。本实验的研究结果为后续研究杂交构树在适应逆境条件调整形态建成的过程中,解析WOX基因所发挥的作用的分子机制打下了基础。