论文部分内容阅读
目的： 肿瘤的侵袭性是区分肿瘤良恶性的标准之一，也是肿瘤致死的原因之一。侵袭性肿瘤的发生是由机体多基因突变的结果，主要是因为人体内癌基匿的激活和抑癌基因的失活所致。CAB39L作为MO25家族成员，可能通过与激酶结合而发挥激酶调节物的功能。应用真核表达质粒转染技术，对细胞株内CAB39L分子表达增强，以探讨该分子对细胞增殖和迁移的作用，为将来进一步进行抑制肿瘤细胞增殖和迁移的动物实验的研究奠定基础，为肿瘤的基因治疗提供基本依据。 方法： 1.提取正常人外周血总RNA，反转录成cDNA，设计引物钓取CAB39L基因。 2.构建克隆载体及原核表达载体，IPTG诱导表达，确保所调取的CAB39L基因可以正常表达。 3.构建真核重组载体并转染EC9706细胞株，筛选出稳定转染细胞株。 4.MTT比色法测定CAB39L基因对EC9706细胞增殖活性的影响，计算细胞增殖抑制率。 5.采用流式细胞法检测CAB39L对EC9706细胞凋亡的影响。 6.通过transwell细胞迁移实验检测CAB39L对EC9706细胞迁移能力的影响。 7.所得实验数据采用SPSS17.0统计软件进行分析，处理。两组间的比较采用T检验，检验水准P＜0.05。 结果: (1)MTT比色法结果表明:正常细胞组、转染空载体组和转染重组载体组OD490值分别为0.696±0.07;0.621±0.05和0.815±0.06。转染CAB39L重组质粒组与正常组相比，存活细胞的数量降低，增殖抑制率为22.42％。转染CAB39L重组质粒组与正常组差异具有统计学意义，P=0.012＜0.05;转染空质粒组与正常组差异无统计学意义，P=0.120＞0.05。 (2)流式细胞术结果表明:正常细胞组、转染空载体组和转染重组载体组细胞凋亡率分别为10.8±0.08，11.2±0.79和13.2±0.91。转染CAB39L重组质粒组的细胞凋亡率为较正常组明显增加，且其差异具有统计学意义，P值为0.016＜0.05。而转染空质粒组与正常组比较无显著性差异，P=0.064＞0.05。 (3) Transwell细胞迁移实验结果表明::正常细胞组、转染空载体组和转染重组载体组细胞跨膜数分别为40±3，52±3和58±4。转染CAB39L重组质粒组与正常组相比，穿过transwell微孔的细胞数量明显减少，且其差异具有统计学意义，P值为0.003＜0.05。转染空质粒组与正常组差异不显著，P=0.187＞0.05。 结论： 1) CAB39L基因对EC9706细胞的增殖具有一定的抑制作用，并促进细胞凋亡。 2) CAB39L基因能够降低EC9706细胞的迁移能力。