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[目的]本实验的目的是建立小鼠慢性支气管哮喘模型,研究甘草和甘草酸对慢性支气管哮喘动物模型的疗效,通过实验证明甘草和甘草酸对哮喘机体气道局部与整体免疫紊乱状态的可能影响,试图从免疫学角度探讨其防治哮喘的作用机制。
[方法]选用100只雌性小鼠,体重(27±3)g,随机分为5组:正常对照组(A组),哮喘模型组(B组),强的松组(C组),甘草组(D组),甘草酸组(E组)。建立小鼠慢性支气管哮喘模型,HE染色观察小鼠肺组织形态学变化和免疫组织化学的方法检测肺组织中eotaxin蛋白的表达,EOS计数,应用酶联免疫吸附试验检测各组小鼠血清IFN-γ,IL-4和IgE的水平,盐酸滴定法测定肺组织和血清中PLA2活性,测定胸腺和脾指数。所有的数据用SPSS11.0统计软件进行统计分析。
[结果]1.卵蛋白致敏和雾化吸入可致小鼠呈现慢性支气管哮喘的病理学改变
用卵蛋白致敏小鼠3周及诱发哮喘4周后,病理切片镜下可见支气管粘膜肿胀充血,支气管内可见粘液栓,气道上皮下有大量嗜酸性粒细胞及淋巴细胞浸润,气道粘膜下组织水肿,纤毛上皮剥离,管腔阻塞。这些病理学改变与人类慢性支气管哮喘的病理改变相似。
2.小鼠气道上皮eotaxin蛋白表达的变化慢性支气管哮喘小鼠气道上皮中eotaxin蛋白表达较正常对照组明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。经强的松治疗后哮喘小鼠气道上皮eotaxin蛋白表达下降(P<0.05),但仍高于正常对照组。甘草和甘草酸治疗后气道上皮eotaxin蛋白的表达也与强的松相似。
3.小鼠外周血的EOS计数的变化慢性支气管哮喘小鼠外周血的EOS计数高于正常对照组(P<0.05),经强的松治疗后EOS计数低于哮喘模型组(P<0.05),但仍高于正常对照组。甘草和甘草酸治疗后EOS计数也与强的松相似。
4.小鼠血清IFN-γ的水平慢性支气管哮喘小鼠的血清IFN-γ低于正常对照组(P<0.05),经强的松治疗后血清IFN-γ高于哮喘模型组(P<0.05)。甘草和甘草酸治疗后血清IFN-γ升高也与强的松相似。
5.小鼠血清IL-4和IgE的水平慢性支气管哮喘小鼠的血清IL-4和IgE高于正常对照组(P<0.05),经强的松治疗后血清IL-4和IgE低于哮喘模型组(P<0.05)。甘草和甘草酸治疗后血清IL-4和IgE降低也与强的松相似。
6.小鼠PLA2活性的变化慢性支气管哮喘小鼠肺组织和血清PLA2活性高于正常对照组(P<0.05),经强的松治疗后肺组织和血清PLA2活性低于哮喘模型组(P<0.05)。甘草和甘草酸治疗后PLA2活性降低也与强的松相似。
7.小鼠免疫器官指数的变化强的松治疗后慢性支气管哮喘小鼠脾指数和胸腺指数比正常对照组明显减少(P<0.05),甘草、甘草酸组和正常对照组间无显著性差异(P>0.05)。
[结论]1.用卵蛋白致敏和雾化吸入可致小鼠呈现慢性支气管哮喘的病理学改变,这种病理变化与哮喘患者相似。
2.慢性支气管哮喘的小鼠具有气道上皮eotaxin蛋白表达明显增高;外周血的EOS明显增高;血清IFN-γ降低,IgE和IL-4明显升高;PLA2活性升高等特点。
3.甘草和甘草酸能有效抑制慢性支气管哮喘小鼠产生的气道炎症,减轻支气管哮喘的病理学症状。甘草和甘草酸防治小鼠哮喘的作用与抑制气道上皮eotaxin蛋白的表达;降低EOS;降低血清IL-4和IgE的浓度,升高IFN-γ的浓度;抑制PLA2活性有关。
4.甘草和甘草酸治疗慢性支气管哮喘疗效和强的松基本相似,副作用较少,在哮喘的防治中可考虑与皮质激素联合应用以增强疗效,减少激素用量及不良反应。