论文部分内容阅读
乌骨鸡是江西地方特色食品资源和地道药材,有着悠久的滋补和药用历史,其特殊性就在于富含黑色素。黑色素是乌骨鸡重要的功能活性成分。本文主要从清除自由基、抑制脂质过氧化以及对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）氧化损伤保护作用方面对乌骨鸡黑色素(SMBSF)抗氧化活性进行研究,同时研究SMBSF抗氧化稳定性,为乌骨鸡黑色素的开发提供理论依据,促进乌骨鸡产业发展。主要研究结果如下:1、以DPPH自由基清除率、超氧自由基清除率、羟基自由基清除率、还原力和螯合Fe2+的能力为考察指标,研究SMBSF的体外抗氧化能力。结果表明:（1）阳性对照抗坏血酸、SMBSF1和SMBSF2清除DPPH自由基的IC50值分别为6μg/m L、182μg/m L、178μg/m L,阳性对照抗坏血酸清除DPPH自由基能力约为SMBSF的30倍;（2）阳性对照抗坏血酸、SMBSF1和SMBSF2清除超氧阴离子自由基的IC50值分别为85μg/m L、398μg/m L、400μg/m L,阳性对照抗坏血酸清除超氧阴离子自由基能力约为SMBSF的4.7倍;（3）阳性对照抗坏血酸、SMBSF1和SMBSF2清除羟基自由基的IC50值分别为1315μg/m L、2374μg/m L、2119μg/m L,阳性对照抗坏血酸清羟基自由基能力约为SMBSF的1.7倍。（4）在实验设定的浓度范围内,SMBSF1和SMBSF2均随其浓度的增加,还原力增大。当浓度为1000μg/m L,SMBSF1和SMBSF2还原力达到最大,均为0.32。（5）SMBSF1和SMBSF2随其浓度的增加,对Fe2+的螯合能力均增加。当SMBSF1和SMBSF2浓度分别为786μg/m L、797μg/m L时对Fe2+的螯合率达到50%。2、采用体外红细胞自氧化、H2O2诱导红细胞氧化以及紫外线照射诱导红细胞氧化模型,研究SMBSF对红细胞氧化溶血的影响。结果表明:（1）阳性对照抗坏血酸、SMBSF1和SMBSF2抑制红细胞自氧化溶血IC50值分别为150μg/m L、874μg/m L、912μg/m L,阳性对照抗坏血酸对红细胞自氧化溶血抑制率约是SMBSF的6倍。（2）阳性对照组抗坏血酸、SMBSF1和SMBSF2抑制H2O2引起的红细胞氧化溶血IC50值分别为217μg/m L、1121μg/m L、1129μg/m L,阳性对照抗坏血酸对H2O2引起的红细胞氧化溶血抑制率约是SMBSF的5倍。（3）阳性对照抗坏血酸、SMBSF1和SMBSF2抑制紫外线引起的红细胞氧化溶血IC50值分别为435μg/m L、1160μg/m L、1168μg/m L,阳性对照抗坏血酸对紫外线引起的红细胞氧化溶血抑制率约是SMBSF的2.7倍。3、采用CCl4诱导肝匀浆脂质过氧化,通过测定过氧化产物丙二醛（MDA）含量变化研究SMBSF对肝匀浆脂质过氧化的影响。结果表明:阳性对照抗坏血酸、SMBSF1和SMBSF2抑制CCl4诱导肝匀浆脂质过氧化产物MDA的IC50值分别为1164μg/m L、1392μg/m L、1387μg/m L,SMBSF对CCl4诱导的肝匀浆脂质过氧化抑制作用与阳性对照抗坏血酸相当。4、采用Fe2+-H2O2诱导体外线粒体悬液脂质过氧化,通过测定过氧化产物MDA含量变化研究SMBSF1对线粒体脂质过氧化的影响。结果表明:SMBSF1能够抑制线粒体肿胀,浓度为1200μg/m L时,对Fe2+-H2O2引起的线粒体脂质过氧化产物MDA抑制率达43.51%。5、采用H2O2诱导HUVEC细胞,建立HUVEC细胞氧化损伤模型,研究SMBSF1对氧化损伤HUVEC细胞的保护作用。结果表明:（1）浓度为12.5、25、50、100、200μg/m L的SMBSF1单独作用于HUVEC细胞24 h,对HUVEC细胞存活率无影响,说明该浓度范围的SMBSF1对HUVEC细胞无毒害作用。（2）不同浓度的H2O2作用于HUVEC细胞2 h,与不加H2O2组相比,浓度为1.00 mmol/L的H2O2使HUVEC细胞存活率下降至50%,因此选择H2O2浓度为1.00 mmol/L作为建立损伤模型的最佳浓度。（3）SMBSF1能够显著提高H2O2诱导损伤后的HUVEC细胞存活率,改善HUVEC细胞损伤形态,并呈量效关系。（4）与空白给药H2O2损伤组相比,SMBSF1能够显著抑制氧化损伤所导致的LDH活力升高,呈量效关系。（5）与空白给药H2O2损伤组相比,SMBSF1能够显著提高氧化损伤所导致的SOD活力减弱,并呈量效关系。（6）与空白给药H2O2损伤组相比,SMBSF1能够显著抑制氧化损伤所导致的MDA含量升高,呈量效关系。6、以清除DPPH自由基活性保持率为指标,考察不同温度、时间对SMBSF抗氧化稳定性影响。结果表明:在不同温度条件下,SMBSF1和SMBSF2对DPPH自由基清除活性随温度的升高呈现下降的趋势,但是变化幅度不大。SMBSF1在4℃时清除DPPH自由基活性保持率最高,而SMBSF2在-20℃时清除DPPH自由基活性保持率最高。在常温条件下,随着储存时间的延长,SMBSF1和SMBSF2清除DPPH自由基活性保持率无明显变化。7、以清除DPPH自由基活性保持率为指标,考察食品配料成分氯化钠、蔗糖和柠檬酸对SMBSF抗氧化稳定性的影响。结果表明:添加质量分数2%~10%的氯化钠溶液1 h后,SMBSF1和SMBSF2清除DPPH自由基活性保持率基本不变;而24 h后,其活性保持率略微下降。添加不同质量分数的蔗糖和柠檬酸1 h和24 h,SMBSF1和SMBSF2清除DPPH自由基活性保持率均基本保持不变。因此,常用的食品配料成分氯化钠、蔗糖和柠檬酸对SMBSF1和SMBSF2的抗氧化稳定性几乎无影响。8、以清除DPPH自由基活性保持率为指标,考察金属离子对SMBSF抗氧化稳定性的影响。结果表明:常见的金属离子K+、Ca2+、Zn2+、Fe3+对SMBSF抗氧化稳定性影响不同。在浓度0~250μg/m L范围内,K+和Ca2+对SMBSF1和SMBSF2清除DPPH自由基活性保持率无影响,Zn2+影响较小,而Fe3+对其影响较为明显。随Fe3+浓度增加,SMBSF1和SMBSF2对DPPH自由基清除活性均下降。Fe3+浓度为250μg/m L时,SMBSF1和SMBSF2活性保持率仅为50%。9、以清除DPPH自由基活性保持率为指标,考察防腐剂山梨酸钾和苯甲酸钠对SMBSF抗氧化稳定性的影响。结果表明:食品中常用的防腐剂山梨酸钾和苯甲酸钠对SMBSF1和SMBSF2稳定性影响不明显,活性保持率均始终保持在97%以上,可以在黑色素产品中添加防腐剂。